作者：宋荣峰

关键词： 目的 ; 恶性肿瘤的浆膜转移常引起恶性浆膜腔积液 ; 后者有时与良性浆膜腔积液难以鉴别 ; 但正确鉴别两者具有重要的临床意义。良恶性浆膜腔积液的鉴别主要依赖实验室检查 ; 但现有的实验诊断技术有时不能满意地解决这一问题。ras基因是重要的原癌基因 ; 其突变常见于多种恶性肿瘤 ; 检测ras基因突变及其蛋白表达情况可能对鉴别良恶性积液具有重要的临床价值。本研究采用PCR-RFLP技术检测浆膜腔积液上清液中K-ras和H-ras基因12位点的突变状况 ; 采用免疫细胞化学染色技术检测浆膜腔积液脱落细胞P21ras蛋白表达状况 ; 探讨它们对恶性浆膜腔积液诊断中的价值。 方法 ; 收集新鲜浆膜腔积液标本 ; 常规离心后收集上清和脱落细胞。取部分脱落细胞涂片 ; 作巴氏染色进行常规细胞学诊断 ; 将积液分为良性与恶性两组。以上清为材料 ; 采用常规蛋白酶K消化、酚/氯仿抽提法提取基因组DNA ; 然后采用PCR技术分别扩增包含K-ras和H-ras基因12位点的DNA片段 ; 并对扩增产物分别用限制性内切酶Mva ; I和Msp ; Ι进行酶切消化 ; 对消化产物纯化后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色显示结果。同时 ; 对脱落细胞作“标准化”处理 ; 包括去除红细胞（存在时）、1%多聚甲醛-PBS固定、用1%BSA-PBS制备细胞悬液、调整细胞浓度为2×106/ml ; 然后制备细胞涂片进行免疫细胞染色 ; 一抗为鼠抗人ras单克隆抗体 ; 二抗为生物素标记的羊抗鼠IgG ; 辣根酶标记链霉卵白素为酶系统 ; DAB显色 ; 高倍光镜下判读结果。 结果 ; 108例浆膜腔积液标本中 ; 恶性积液53例 ; 良性积液55例。101例K-ras和H-ras基因12位点扩增获得成功（93.5%） ; 其中52例恶性积液中K-ras和H-ras基因12位点突变率分别为55.8%和30.8% ; 49例良性积液中突变率分别为10.2%和4.1% ; 两种不同性质积液上清的K-ras和H-ras基 因的突变率差异均有显著性统计学意义（P<0.001）。K-ras和H-ras基因12位点突变诊断恶性积液的特异性为89.8%和95.9% ; 阳性预测值为85.3%和88.9% ; 阴性预测值65.8%和56.6% ; 诊断符合率72.3%和62.4%。 53例恶性积液中有39例肿瘤细胞P21ras蛋白免疫细胞化学染色阳性（73.6%） ; 且多为强阳性或阳性 ; 55例良性积液中有12例可见P21ras蛋白免疫细胞化学染色阳性（21.8 ; %） ; 且皆为阳性或弱阳性。两组间染色的阳性率及阳性强度的差异均有显著性统计学意义（P<0.001）。P21ras蛋白免疫细胞化学染色诊断恶性积液的特异性为78.2% ; 阳性预测值76.5% ; 阴性预测值75.4% ; 诊断符合率达75.9%。 将ras基因突变和P21ras蛋白免疫细胞化学染色进行并联式和串联式联合分析 ; 对诊断恶性积液的敏感性为88.7%和49.1% ; 特异性为69.1%和96.4% ; 阳性预测值为73.4%和92.9% ; 阴性预测值为86.4%和63.9% ; 诊断符合率为78.7%和73.2%。并联式联合分析可提高诊断敏感性 ; 串联式分析则提高诊断的可靠性。 结论 1．恶性浆膜腔积液上清中K-ras基因12位点突变频率较高 ; 对诊断恶性浆膜腔积液有一定的临床价值。 2．恶性浆膜腔积液上清中H-ras基因12位点突变频率较低 ; 对诊断恶性浆膜腔积液的临床价值较小。 3．浆膜腔积液中脱落肿瘤细胞P21ras蛋白免疫细胞化学染色多为阳性 ; 良性细胞多为阴性 ; 对恶性体腔积液的诊断有较大的价值。 4．ras基因突变和P21ras蛋白表达联合检测 ; 有助于提高诊断恶性积液的敏感性或特异性 ; 提高恶性积液的检出率或诊断可靠性。 5．浆膜腔积液标本离心后取微量上清 ; 采用常规酚/氯仿法即可提取出基因组DNA ; 能成功用于PCR-RFLP分析。

论文级别：硕士

学位年度：2003

作者：陈兴玲

关键词：K-ras基因 ; DPC4基因 ; 基因变异 ; 胰腺肿瘤 ; 多聚酶链反应

论文级别：硕士

学位年度：2003

作者：哈尼

关键词：胃癌 ; 裸鼠 ; 动物模型 ; 组织病理学

论文级别：博士

学位年度：2012

作者：张焜和

关键词：乙肝肝硬化 ; 无症状HBsAg携带者 ; 慢性乙肝病毒感染 ; 遗传易感性 ; 基因多态性 ; 数学模型 ; 分子预测

论文级别：博士

学位年度：2009

作者：陈文学

关键词：原发性肝癌 ; 血清 ; 核酸适配子 ; SELEX ; 诊断

论文级别：博士

学位年度：2011

作者：蒋庆锋

关键词：食管 ; 癌组织 ; 拉曼光谱 ; 诊断

论文级别：硕士

学位年度：2007

作者：吴建军

关键词：消化性溃疡 ; 并发症 ; 气象因子 ; 季节 ; 人体舒适度指数

论文级别：硕士

学位年度：2006

作者：罗杰

关键词：肝功能衰竭 ; 内毒素 ; 半乳糖胺 ; 凋亡

论文级别：硕士

学位年度：2007

作者：蒋霞

关键词：桃树根提取物 ; 非菌性前列腺炎 ; 抗炎作用 ; 组织病理学

论文级别：硕士

学位年度：2003

作者：刘东林

关键词：端粒酶 ; p53基因 ; 基因变异 ; 胸水 ; 腹水 ; 肿瘤诊断

论文级别：硕士

学位年度：2001