慢性盆腔炎的证候规律调查及活血化瘀法调节T细胞亚群和红细胞免疫的实验研究
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摘要
目的:本课题旨在通过查阅理论文献及进行大样本的调查研究,总结慢性盆腔炎(chronic pelvic inflammatory disease,CPID)的病因病机及证候规律特征;应用活血化瘀方剂桂枝茯苓胶囊对CPID模型大鼠进行实验研究,试以阐明活血化瘀法治疗CPID对T细胞亚群和红细胞免疫功能的影响以及调节机理,从而为进一步揭示CPID的发病机制提供线索,为中医药治疗CPID的作用机理奠定现代生物学基础。
方法:1、理论和文献研究:通过收集文献资料和经典著作中有关慢性盆腔炎的相关内容,论述CPID的病因病机及其辨证论治方法。2、临床研究:通过填写慢性盆腔炎中医证候调查表方式进行大样本证候规律调查,应用聚类分析及主成分分析法对调查资料进行分析。3、实验研究:以Wistar雌性大鼠为受试对象,用混合菌(大肠杆菌、乙型溶血性链球菌和金黄色葡萄球菌)加机械损伤造模法建立CPID大鼠模型。96只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、桂枝茯苓胶囊低、中、高剂量组和少腹逐瘀胶囊、金刚藤胶囊组。应用光镜方法对各组大鼠子宫组织进行形态学观察;应用流式细胞术检测各组大鼠脾脏CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞及CD4~+CD25~+调节性T细胞(regulation T cell,Treg)数量百分比及CD4~+T/CD8~+T细胞比值;应用红细胞免疫花环试验检测大鼠血红细胞C3b受体花环率(RBC-C3bRR)及红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)。
结果:1、理论研究认为CPID以“血瘀”为基本病机,活血化瘀法应是治疗此病的基本治法。2、调查分析得出CPID的五大证型:湿热瘀结证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证、寒湿瘀滞证、气虚血瘀证。各证型的百分比分别为:31.3%、23.8%、19.7%、14.6%、10.6%。湿热瘀结证的主成分分别是:主成分1:小腹灼痛、脉弦滑、月经量多、经血鲜红或深红;主成分2:舌苔腻;主成分3:白带气臭;主成分4:舌质红。气滞血瘀证的主成分分别是:主成分1:痛经、舌质瘀点瘀斑、小腹胀痛或刺痛;主成分2:脉弦涩、乳房胀痛或刺痛;主成分3:喜叹息。肾虚血瘀证的主成分分别是:主成分1:面淡而晦黯、脉沉涩、肌肤甲错、腰膝酸软;主成分2:小腹酸痛;主成分3:舌质黯红。寒湿瘀滞证的主成分分别是:主成分1:形寒肢冷、月经量少、脉紧涩;主成分2:小腹冷痛;主成分3:大便溏泄。气虚血瘀证的主成分分别是:主成分1:体倦乏力、小腹隐痛、经血质稀;主成分2:脉弦涩无力。结果表明,各证型均有血瘀病机表现,说明“血瘀”为本病基本病机。3、以活血化瘀法为主的桂枝茯苓胶囊、少腹逐瘀胶囊及以清热解毒法为主的金刚藤胶囊对CPID模型大鼠均有明显疗效。子宫组织光镜观察,炎性细胞减少,炎性浸润减轻。各给药组大鼠较模型组大鼠CD3~+、CD4~+T细胞数量百分比及CD4~+T/CD8~+T细胞比值明显升高,CD8~+T细胞数量百分比明显降低,趋向于正常。中、高剂量桂枝茯苓胶囊能明显降低模型大鼠异常升高的CD4~+CD25~+Treg数量百分比,趋向于正常。T细胞亚群各指标相关性分析显示,CD4~+CD25~+Treg与CD4~+T呈负相关,与CD4~+T/CD8~+T细胞比值呈负相关。桂枝茯苓胶囊及少腹逐瘀胶囊能调节异常的红细胞免疫功能,使RBC-C3bRR水平升高,RBC-ICR降低,恢复正常免疫功能。
结论:理论文献研究及临床调查分析表明CPID的病机以“血瘀”为主,因此活血化瘀法是基本治法。实验研究证明,CPID模型大鼠存在免疫功能的紊乱或低下,以活血化瘀法为主的方剂通过调控T细胞亚群和红细胞的免疫功能,达到治疗CPID的目的,此是活血化瘀法治疗CPID的机制之一。
Objective:To explore the law of syndrome in chronic pelvic inflammatory disease (CPID) by studying of literatures and classical works and investigation on large sample.To explore the influence on immunologic function of T lymphocyte subpopulation and erythrocyte by ways of promoting blood flow and dissipating phlegm working on the model rats.
Methods:
1.To elaborate on pathogenesis and treatment according to syndrome differentiation of CPID based on literatures and classical works.
2.To progress clinical investigation on syndrome in CPID by questionnaire and to analyze it by the statistical methods.
3.The models of rats with CPID(Wistar female rats) were successfully made by infecting three various bacteria into the rats.96 female Wistar rats were randomly classified into the following different guoups:the normal group,the simulative model group,the model group,the low dose of Guizhifuling capsule group,the medium dose of Guizhifuling capsule group,the high dose of Guizhifuling capsule group and the Shaofuzhuyu capsule group,the Jingangteng group both as the control groups.The light microscope was used in the morphologic research.The method of Flow Cytometry(FCM) was used to detect the percentage of the amount of CD3~+T,CD4~+T,CD8~+T and CD4~+CD25~+ regulation T cell(CD~4+CD25~+Treg) in the spleens of the model rats with CPID,accordingly CD4~+T/CD8~+T ratio obtained by calculation.The method of Rosette formation Test was used to detect the RBC-C3bRR and RBC-ICR in the blood serum.
Results:
1.The main pathogenesis of CPID is stasis of blood and the main treatment is the ways of promoting blood flow and dissipating phlegm.
2.CPID can be classified into five patterns of syndrome.The five patterns of syndrome are stagnation of blood with dampness and heat type,qi-stagnancy and blood stasis type,stagnancy of stagnation of blood type due to deficiency of kidney,stagnation of blood with dampness and cold type and deficiency of vital energy and blood stasis type with the percentages of 31.3,23.8,19.7,14.6 and 10.6.
3.The low dose of Guizhifuling capsule group,the medium dose of Guizhifuling capsule group,the high dose of Guizhifuling capsule group and Shaofuzhuyu capsule group,which all obey the ways of promoting blood flow and dissipating phlegm and Jingangteng group which obeys the ways of clearing away the heat-evil and expelling superficial evils have curative effect upon on the model rats.The inflammatory extent of the uterine constitution has been alleviated.All treating medicines have significantly increased percentages amount of CD3~+,CD4~+T and CD4~+T/CD8~+T ratio in the spleens of the model rats and reduced percentages amount of CD8~+T in the spleens of the model rats. The medium and high dose of Guizhifuling capsules have significantly increased percentages amount of CD4~+CD25~+Treg in the spleens of the model rats.A negative correlation is found between CD4~+CD25~+Treg and CD4~+T.That is the same between CD4~+CD25~+Treg and CD4~+T/CD8~+T.Guizhifuling capsule and Shaofuzhuyu capsule have significantly increased RBC-C3bRR in the serum of the model rats and decreased RBC-ICR in the serum of the model rats.
Conclusion:According to the investigation of syndrome and research on pathogenesis theory of CPID,we perform experiment by ways of promoting blood flow and dissipating phlegm working on the model rats.The abnormal and disorder immunologic function of T lymphocyte subpopulation and red blood cell plays an important part in the disease.The medicines whose chief therapeutic method is promoting blood flow and dissipating phlegm can alleviate inflammation,adjust immunity of T lymphocyte subpopulation and red blood cell.
方法:1、理论和文献研究:通过收集文献资料和经典著作中有关慢性盆腔炎的相关内容,论述CPID的病因病机及其辨证论治方法。2、临床研究:通过填写慢性盆腔炎中医证候调查表方式进行大样本证候规律调查,应用聚类分析及主成分分析法对调查资料进行分析。3、实验研究:以Wistar雌性大鼠为受试对象,用混合菌(大肠杆菌、乙型溶血性链球菌和金黄色葡萄球菌)加机械损伤造模法建立CPID大鼠模型。96只大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、桂枝茯苓胶囊低、中、高剂量组和少腹逐瘀胶囊、金刚藤胶囊组。应用光镜方法对各组大鼠子宫组织进行形态学观察;应用流式细胞术检测各组大鼠脾脏CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞及CD4~+CD25~+调节性T细胞(regulation T cell,Treg)数量百分比及CD4~+T/CD8~+T细胞比值;应用红细胞免疫花环试验检测大鼠血红细胞C3b受体花环率(RBC-C3bRR)及红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)。
结果:1、理论研究认为CPID以“血瘀”为基本病机,活血化瘀法应是治疗此病的基本治法。2、调查分析得出CPID的五大证型:湿热瘀结证、气滞血瘀证、肾虚血瘀证、寒湿瘀滞证、气虚血瘀证。各证型的百分比分别为:31.3%、23.8%、19.7%、14.6%、10.6%。湿热瘀结证的主成分分别是:主成分1:小腹灼痛、脉弦滑、月经量多、经血鲜红或深红;主成分2:舌苔腻;主成分3:白带气臭;主成分4:舌质红。气滞血瘀证的主成分分别是:主成分1:痛经、舌质瘀点瘀斑、小腹胀痛或刺痛;主成分2:脉弦涩、乳房胀痛或刺痛;主成分3:喜叹息。肾虚血瘀证的主成分分别是:主成分1:面淡而晦黯、脉沉涩、肌肤甲错、腰膝酸软;主成分2:小腹酸痛;主成分3:舌质黯红。寒湿瘀滞证的主成分分别是:主成分1:形寒肢冷、月经量少、脉紧涩;主成分2:小腹冷痛;主成分3:大便溏泄。气虚血瘀证的主成分分别是:主成分1:体倦乏力、小腹隐痛、经血质稀;主成分2:脉弦涩无力。结果表明,各证型均有血瘀病机表现,说明“血瘀”为本病基本病机。3、以活血化瘀法为主的桂枝茯苓胶囊、少腹逐瘀胶囊及以清热解毒法为主的金刚藤胶囊对CPID模型大鼠均有明显疗效。子宫组织光镜观察,炎性细胞减少,炎性浸润减轻。各给药组大鼠较模型组大鼠CD3~+、CD4~+T细胞数量百分比及CD4~+T/CD8~+T细胞比值明显升高,CD8~+T细胞数量百分比明显降低,趋向于正常。中、高剂量桂枝茯苓胶囊能明显降低模型大鼠异常升高的CD4~+CD25~+Treg数量百分比,趋向于正常。T细胞亚群各指标相关性分析显示,CD4~+CD25~+Treg与CD4~+T呈负相关,与CD4~+T/CD8~+T细胞比值呈负相关。桂枝茯苓胶囊及少腹逐瘀胶囊能调节异常的红细胞免疫功能,使RBC-C3bRR水平升高,RBC-ICR降低,恢复正常免疫功能。
结论:理论文献研究及临床调查分析表明CPID的病机以“血瘀”为主,因此活血化瘀法是基本治法。实验研究证明,CPID模型大鼠存在免疫功能的紊乱或低下,以活血化瘀法为主的方剂通过调控T细胞亚群和红细胞的免疫功能,达到治疗CPID的目的,此是活血化瘀法治疗CPID的机制之一。
Objective:To explore the law of syndrome in chronic pelvic inflammatory disease (CPID) by studying of literatures and classical works and investigation on large sample.To explore the influence on immunologic function of T lymphocyte subpopulation and erythrocyte by ways of promoting blood flow and dissipating phlegm working on the model rats.
Methods:
1.To elaborate on pathogenesis and treatment according to syndrome differentiation of CPID based on literatures and classical works.
2.To progress clinical investigation on syndrome in CPID by questionnaire and to analyze it by the statistical methods.
3.The models of rats with CPID(Wistar female rats) were successfully made by infecting three various bacteria into the rats.96 female Wistar rats were randomly classified into the following different guoups:the normal group,the simulative model group,the model group,the low dose of Guizhifuling capsule group,the medium dose of Guizhifuling capsule group,the high dose of Guizhifuling capsule group and the Shaofuzhuyu capsule group,the Jingangteng group both as the control groups.The light microscope was used in the morphologic research.The method of Flow Cytometry(FCM) was used to detect the percentage of the amount of CD3~+T,CD4~+T,CD8~+T and CD4~+CD25~+ regulation T cell(CD~4+CD25~+Treg) in the spleens of the model rats with CPID,accordingly CD4~+T/CD8~+T ratio obtained by calculation.The method of Rosette formation Test was used to detect the RBC-C3bRR and RBC-ICR in the blood serum.
Results:
1.The main pathogenesis of CPID is stasis of blood and the main treatment is the ways of promoting blood flow and dissipating phlegm.
2.CPID can be classified into five patterns of syndrome.The five patterns of syndrome are stagnation of blood with dampness and heat type,qi-stagnancy and blood stasis type,stagnancy of stagnation of blood type due to deficiency of kidney,stagnation of blood with dampness and cold type and deficiency of vital energy and blood stasis type with the percentages of 31.3,23.8,19.7,14.6 and 10.6.
3.The low dose of Guizhifuling capsule group,the medium dose of Guizhifuling capsule group,the high dose of Guizhifuling capsule group and Shaofuzhuyu capsule group,which all obey the ways of promoting blood flow and dissipating phlegm and Jingangteng group which obeys the ways of clearing away the heat-evil and expelling superficial evils have curative effect upon on the model rats.The inflammatory extent of the uterine constitution has been alleviated.All treating medicines have significantly increased percentages amount of CD3~+,CD4~+T and CD4~+T/CD8~+T ratio in the spleens of the model rats and reduced percentages amount of CD8~+T in the spleens of the model rats. The medium and high dose of Guizhifuling capsules have significantly increased percentages amount of CD4~+CD25~+Treg in the spleens of the model rats.A negative correlation is found between CD4~+CD25~+Treg and CD4~+T.That is the same between CD4~+CD25~+Treg and CD4~+T/CD8~+T.Guizhifuling capsule and Shaofuzhuyu capsule have significantly increased RBC-C3bRR in the serum of the model rats and decreased RBC-ICR in the serum of the model rats.
Conclusion:According to the investigation of syndrome and research on pathogenesis theory of CPID,we perform experiment by ways of promoting blood flow and dissipating phlegm working on the model rats.The abnormal and disorder immunologic function of T lymphocyte subpopulation and red blood cell plays an important part in the disease.The medicines whose chief therapeutic method is promoting blood flow and dissipating phlegm can alleviate inflammation,adjust immunity of T lymphocyte subpopulation and red blood cell.
引文
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