腺病毒介导h BDNF基因修饰骨髓间充质干细胞静脉移植对大鼠脊髓损伤后OMgp表达的影响及意义
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摘要
目的探究人脑源性神经营养因子(h BDNF)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)静脉移植治疗大鼠脊髓损伤(SCI)后对少突胶质细胞髓鞘糖蛋白表达(OMgp)的影响及意义。方法构建表达h BDNF全长的并以绿色荧光蛋白(EGFP)基因为标志基因的5型复制缺陷型重组腺病毒载体(Ad5-hBDNF-EGFP),分离大鼠BMSCs并培养扩增,转染Ad5-hBDNF-EG-FP及EGFP空白载体,观察细胞荧光表达情况,Western印迹法检测细胞h BDNF表达水平。将18只SD大鼠随机分为A、B、C组,A组进行静脉移植h BDNF-EGFP-BMSCs,B组进行静脉移植空白载体-EGFP-BMSCs,C组不进行BMSCs移植,3组均采用改良Allen重物打击法制作T10节段脊髓损伤模型。观察大鼠建模后24 h及1、3、5 w脊髓损伤的行为学(BBB)评分及第5周皮层体感诱发电位(CESP),Western印迹法检测第5周大鼠损伤区脊髓h BDNF、OMgp蛋白表达。结果 h BDNF-EGFP-BMSCs中h BDNF表达水平显著高于空白载体-EGFP-BMSCs(P<0. 05),且细胞呈现较强绿色荧光表达。A、B组3、5 w时BBB评分显著高于C组(P<0. 05),且第5周时A组显著高于B组(P<0. 05)。第5周,A、B组CSEP潜伏期缩短及峰值增加较C组明显(P<0. 05),且A组增加较B组明显(P<0. 05); A组损伤区脊髓组织h BDNF表达显著高于B、C组(P<0. 05); A组OMgp表达显著低于B、C组,且B组显著低于C组(P<0. 05)。结论静脉移植h BDNF-EGFP-BMSCs可通过抑制OMgp的表达促进损伤脊髓结构修复及功能重建,是SCI有效的治疗手段。
引文
1马娇,张雪梅.骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤的分子机制[J].脑与神经疾病杂志,2016;24(2):117-9.
2贾叙锋,龙苗,戢勇,等.SD大鼠脊髓损伤后微环境的模拟实验[J].中国组织工程研究,2016;20(5):628-34.
3刘凯,刘文革,王振宇,等.h BDNF基因修饰骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响[J].中华创伤杂志,2012;28(4):375-80.
4刘凯.hBDNF基因修饰骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响[D].福州:福建医科大学,2012.
5窦芳芳.少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(OMgp)在脊髓损伤前后的表达格局及相关功能研究[D].上海:上海交通大学,2009.
6王长昇.腺病毒介导hBDNF基因修饰骨髓间质干细胞静脉移植治疗大鼠脊髓损伤[D].福州:福建医科大学,2009.
7林建华,王长昇,吴朝阳.人脑源性神经营养因子基因修饰BM-SCs经静脉移植对大鼠损伤脊髓结构和功能影响的初步研究[J].中国修复重建外科杂志,2010;24(8):982-7.
8 Basso DM,Beattie MS,Bresnahan JC,et al.MASCIS evaluation of open field locomotor scores:effects of experience and teamwork on reliability.Multicenter Animal Spinal Cord Injury Study[J].J Neurotrauma,1996;13(7):343-59.
9韦宋谱,丁道芳,王学宗,等.骨髓间充质干细胞的培养及向软骨细胞诱导的方法学研究进展[J].中国矫形外科杂志,2012;20(11):1017-9.
10李树贵,于海翔,杨光.大鼠BMSCs的体外分离培养和鉴定[J].中国实验诊断学,2011;15(11):1840-2.
11张建军,史焕昌,杨卫山,等.亚低温条件下脊髓损伤模型大鼠神经再生微环境及运动功能的变化[J].中国组织工程研究,2015;19(27):4316-21.
12 Karagyaur M,Dyikanov D,Makarevich P,et al.Non-viral transfer of BDNF and u PA stimulates peripheral nerve regeneration[J].Biomed Pharmacother,2015;74(8):63-70.
13 Sasaki M,Radtke C,Tan AM,et al.BDNF-hypersecreting human mesenchymal stem cells promote functional recovery,axonal sprouting,and protection of corticospinal neurons after spinal cord injury[J].J Neurosci,2009;29(47):14932-41.
14 Mezey E,Chandross KJ,Harta RA,et al.Turning blood into brain:cells bearing neuronal antigens generated in vivo from bone marrow[J].Science,2000;290(5497):1779-82.
15 Lee X,Hu Y,Zhang Y,et al.Oligodendrocyte differentiation and myelination defects in OMgp null mice[J].Mol Cell Neurosci,2011;46(4):752-61.
2贾叙锋,龙苗,戢勇,等.SD大鼠脊髓损伤后微环境的模拟实验[J].中国组织工程研究,2016;20(5):628-34.
3刘凯,刘文革,王振宇,等.h BDNF基因修饰骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响[J].中华创伤杂志,2012;28(4):375-80.
4刘凯.hBDNF基因修饰骨髓间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响[D].福州:福建医科大学,2012.
5窦芳芳.少突胶质细胞髓鞘糖蛋白(OMgp)在脊髓损伤前后的表达格局及相关功能研究[D].上海:上海交通大学,2009.
6王长昇.腺病毒介导hBDNF基因修饰骨髓间质干细胞静脉移植治疗大鼠脊髓损伤[D].福州:福建医科大学,2009.
7林建华,王长昇,吴朝阳.人脑源性神经营养因子基因修饰BM-SCs经静脉移植对大鼠损伤脊髓结构和功能影响的初步研究[J].中国修复重建外科杂志,2010;24(8):982-7.
8 Basso DM,Beattie MS,Bresnahan JC,et al.MASCIS evaluation of open field locomotor scores:effects of experience and teamwork on reliability.Multicenter Animal Spinal Cord Injury Study[J].J Neurotrauma,1996;13(7):343-59.
9韦宋谱,丁道芳,王学宗,等.骨髓间充质干细胞的培养及向软骨细胞诱导的方法学研究进展[J].中国矫形外科杂志,2012;20(11):1017-9.
10李树贵,于海翔,杨光.大鼠BMSCs的体外分离培养和鉴定[J].中国实验诊断学,2011;15(11):1840-2.
11张建军,史焕昌,杨卫山,等.亚低温条件下脊髓损伤模型大鼠神经再生微环境及运动功能的变化[J].中国组织工程研究,2015;19(27):4316-21.
12 Karagyaur M,Dyikanov D,Makarevich P,et al.Non-viral transfer of BDNF and u PA stimulates peripheral nerve regeneration[J].Biomed Pharmacother,2015;74(8):63-70.
13 Sasaki M,Radtke C,Tan AM,et al.BDNF-hypersecreting human mesenchymal stem cells promote functional recovery,axonal sprouting,and protection of corticospinal neurons after spinal cord injury[J].J Neurosci,2009;29(47):14932-41.
14 Mezey E,Chandross KJ,Harta RA,et al.Turning blood into brain:cells bearing neuronal antigens generated in vivo from bone marrow[J].Science,2000;290(5497):1779-82.
15 Lee X,Hu Y,Zhang Y,et al.Oligodendrocyte differentiation and myelination defects in OMgp null mice[J].Mol Cell Neurosci,2011;46(4):752-61.
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