原位杂交技术在斜带石斑鱼神经坏死病毒检测中的应用

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• 出版年：2008
• 作者：陈晓艳；何建国
• 单位1：中山大学生命科学学院
• 单位2：暨南大学生物工程学系
• 出生年：1972 博士
• 职称：讲师
• 语种：中文
• 作者关键词：神经坏死病毒；地高辛；原位杂交
• 起始页：1
• 总页数：4
• 经费资助：国家863计划项目(2001AA601010)；暨南大学引进人才启动基金项目；广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室开放基金项目(2007A004)
• 刊名：海洋科学
• 是否内版：否
• 刊频：月刊
• 创刊时间：1977
• 主管单位：中国科学院
• 主办单位：中国科学院海洋研究所
• 主编：侯一筠
• 地址：青岛南海路7号
• 邮编：266071
• 电子信箱：MSJ@ms.qdio.ac.cn
• 网址：Http：//msj.qdio.ac.cn
• 卷：32
• 期：6
• 期刊索取号：P226.06 449-22

摘要

根据斜带石斑鱼（Epinephelus coioids）神经坏死病毒(orange-spotted nervous necrosis vlrus，OGNNV)的主衣壳蛋白(major capsid protein，MCP)基因的保守序列，设计一对引物，从感染OGNNV的斜带石斑鱼组织匀浆液提取RNA为模板进行RT-PCR扩增，得到426bp的cDNA片断。用得到的RT-PCR产物加上地高辛(DIG)标记作为核酸探针。通过注射病毒提取液人工感染一组斜带石斑鱼，解剖感染病毒的斜带石斑鱼，从中分离出脑和眼睛，运用原位杂交技术检测组织中的OGNNV。实验表明，原位杂交具有较高的灵敏性和特异性，可以用原位杂交的办法来检测养殖的石斑鱼是否有携带该病毒，达到监控和预防神经坏死病爆发的目的。本实验还采用了H&E染色方法检测了感染NNV的石斑鱼脑部和眼部组织，观察细胞内的坏死部分。与原位杂交做对比，提高了检测的可靠性和准确性。本实验建立的石斑鱼神经坏死病毒的ISH检测方法有着较高的特异性和敏感性，易于操作，有助于石斑鱼神经坏死病毒的组织定位、发病机理的研究。