植物脱毒苗组织培养技术的研究
摘要
本论文对菊花、郁金香和康乃馨进行了脱除病毒培育无毒苗的适用技术研究。现将主要结果摘要如下：菊花脱毒苗培育试验中，以患花叶病“国庆”菊花幼嫩茎尖长0.5-0.8mm为外植体。外植体愈伤组织的诱导和生长及分化出芽均受到BA和NAA配比的影响。在MS+BA2.0mg／1+NAA0.1mg／1培养基上培养，愈伤组织诱导效果最好，诱导率达96.0％；愈伤组织分化出芽以MS+BA3.0mg／1+NAA0.1mg／1效果最佳，分化率达60.0％，每块愈伤组织平均分化出4个芽。幼苗2cm长时切割转接到1／2MS培养基上培养，10天后长出白色小根，生根率达78.0％；在含有NAA0.1-0.5mg／1培养基上生根率可达92.0％以上，在1／2MS+NAA0.1mg／1中培养的每株生根数最多。郁金香脱毒组织培养，以0.3-0.5mm茎尖为外植体。茎尖愈伤组织的诱导在MS+NAA2.0mg／1+BA1.5mg／1培养基上诱导率达94.0％；愈伤组织分化出芽在MS+NAA0.5mg／1+BA1.5mg／1培养基分化率达86.0％；用茎尖直接分化芽的试验中，在MS+NAA0.1mg／1+2，4-D0.1mg／1上茎尖成活率达90.0％，分化率达60.0％；郁金香组培苗生根培养，在1／2MS+NAA0.5mg／1培养基中生根率达80.0％，平均每苗生根5.2条。康乃馨脱毒组培试验表明，用0.3mm茎尖接种，以MS+BA0.7mg／1+NAA0.1-0.2mg／1为培养基诱导愈伤组织效果好，诱导率为90.0％；愈伤组织分化出芽以MS+BA0.8mg／1+NAA0.2mg／1培养分化最好，分化率为74.0％，平均每块愈伤组织有芽5.9个。在1／2MS+NAA0.01mg／1+IBA0.05-1.0mg／1上诱导生根时间短，根条数适中，生根率为86.0-94.0％；在康乃馨组培试验中采取降低培养温度、增加光照强度，在培养基中加入20万单位青霉素可减轻玻璃苗现象。三种花卉的组培苗，经症状观察、汁液传染试验、内含体染色检查等病毒学试验检测，以后两种方法结果为依据，菊花脱毒苗有19株，脱毒率63.3％；郁金香、康乃馨脱毒苗均有13株，脱毒率均为65％。
Three kinds of virus-free plants about Chrysanthemum, Tulip and Caryophyllus were studied in the paper. In test of virus-free Chrysanthemum plant, the Chrysanthemum stem tips with a length of 0.5-0.8mm is suitable for explants, which came from "Guoqing" Chrysanthemum with CMV. They were inoculated in MS medium with different consistency of BA and NAA. The results showed that the proportion of BA and NAA affected callus inducing and growing. Callus grew well on MS+BA2.0mg/l+NAA0.1mg/l, 96.0% explants formed. Callus differentiation was affected by different consistency of BA and NAA. About 60.0% callus developed on MS+BA3.0mg/l+NAA0.1mg/l, and there were 4 buds every callus. The buds were cut and transferred into 1/2MS medium, and they generated small write roots after 10 days. The rooting rate was 78.0% into 1/2 MS medium without NAA, and more than 92.0% into medoum with different consistency of NAA. But it was good to rooting into medium with l/2MS+NAA0.1mg/l. In test of virus-free Tulip plant, ste
m tips with a length of 0.3-0.5mm is suitable for explants. Stem tips induced callus well on medium MS+NAA2.0mg/l+BA1.5mg/l, with 94.0% explants formed. About 86.0% callus of Tulip developed on MS+NAA0.5mg/l+BA 1.5mg/l. About 60.0% Tulip stem tips directly diffrented into buds well on MS+NAA0.1mg/l +2,4-D0.1mg/l. The rooting rate was 80.0% into l/2MS+NAA0.5mg/l, and there were 5.2 buds every callus. In test of virus-free Caryophyllus plant, stem tips with a length of 0.3 mm is suitable for explants. The Caryophyllus callus grew well on MS+BA0.7mg/l+NAA0.1-0.2mg/l, 90.0% explant formed. About 74.0% callus developed on MS+BA0.8mg/l +NAA0.2mg/l, and there were 5.9 buds every callus. The rate of rooting and transpiant were 86.0%-94.0% on l/2MS+NAA0.01mg/l+IBA0.05-1.0mg/l. The ratio of Caryophyllus glassy plant counld be lightened through reducing culture tempurature, increasing illumination or adding penicillin into medium. Virus-free plants of three kinds of flower were tested by sap transmission, symptom obser
ving and endosome dyring. By testing, there were 19 Chrysanthemum virus-free plants, which virus-free rate is 63.3%, 13 Tulip virus-free plants and Caryophyllus virus-free plants, which virus-free rate is 65% in the paper.
Three kinds of virus-free plants about Chrysanthemum, Tulip and Caryophyllus were studied in the paper. In test of virus-free Chrysanthemum plant, the Chrysanthemum stem tips with a length of 0.5-0.8mm is suitable for explants, which came from "Guoqing" Chrysanthemum with CMV. They were inoculated in MS medium with different consistency of BA and NAA. The results showed that the proportion of BA and NAA affected callus inducing and growing. Callus grew well on MS+BA2.0mg/l+NAA0.1mg/l, 96.0% explants formed. Callus differentiation was affected by different consistency of BA and NAA. About 60.0% callus developed on MS+BA3.0mg/l+NAA0.1mg/l, and there were 4 buds every callus. The buds were cut and transferred into 1/2MS medium, and they generated small write roots after 10 days. The rooting rate was 78.0% into 1/2 MS medium without NAA, and more than 92.0% into medoum with different consistency of NAA. But it was good to rooting into medium with l/2MS+NAA0.1mg/l. In test of virus-free Tulip plant, ste
m tips with a length of 0.3-0.5mm is suitable for explants. Stem tips induced callus well on medium MS+NAA2.0mg/l+BA1.5mg/l, with 94.0% explants formed. About 86.0% callus of Tulip developed on MS+NAA0.5mg/l+BA 1.5mg/l. About 60.0% Tulip stem tips directly diffrented into buds well on MS+NAA0.1mg/l +2,4-D0.1mg/l. The rooting rate was 80.0% into l/2MS+NAA0.5mg/l, and there were 5.2 buds every callus. In test of virus-free Caryophyllus plant, stem tips with a length of 0.3 mm is suitable for explants. The Caryophyllus callus grew well on MS+BA0.7mg/l+NAA0.1-0.2mg/l, 90.0% explant formed. About 74.0% callus developed on MS+BA0.8mg/l +NAA0.2mg/l, and there were 5.9 buds every callus. The rate of rooting and transpiant were 86.0%-94.0% on l/2MS+NAA0.01mg/l+IBA0.05-1.0mg/l. The ratio of Caryophyllus glassy plant counld be lightened through reducing culture tempurature, increasing illumination or adding penicillin into medium. Virus-free plants of three kinds of flower were tested by sap transmission, symptom obser
ving and endosome dyring. By testing, there were 19 Chrysanthemum virus-free plants, which virus-free rate is 63.3%, 13 Tulip virus-free plants and Caryophyllus virus-free plants, which virus-free rate is 65% in the paper.
引文
[1] 杨增海．园艺植物组织培养[M]．北京：农业出版社，1987：68．
[2] 张锡津，田国忠，李江山．泡桐组织培养脱毒技术[J]．林业科技通讯，1994，2：30
[3] 孙朝晖，温秀军，孙士学．枣疯病研究现状．河北林业科技[J]．1998，2：50-53．
[4] 朱本明．泡桐丛枝病研究现状[J]．山东林业科技，1986，2：1-6．
[5] 河南许昌地区林科所，泡桐丛枝病研究进展[J]．许昌林业，1981，1-13．
[6] 张学武，宋晓斌，郑文锋，我国泡桐丛枝病育种研究进展[J]．陕西林业科技，1995，3：57-60．
[7] 周俊义，刘孟军，侯保林．枣疯病研究进展[J]．果树科学，1998，15(4)：354-355．
[8] 李云主编．林果花菜组织培养快速育苗技术[M]．北京：中国林业出版社，2003：109．
[9] 郑平，张雄坚，陈应东，等．广东甘薯组培脱毒苗田间比较试验初报[J]．广东农业科学，1991，5：12-14．
[10] 杭玲，潘颖南，黄卓忠，等．革莓匍匐茎尖组织培养与脱毒苗生产[J]．广西林业科学，1999，6：319-320．
[11] 崔月花，张彪，高红明，等．唐菖蒲茎尖培养脱病毒的研究．江苏农业研究，2000，21(4)：88-89．
[12] 兰平，李文凤，朱水芳，等．热处理结合茎尖培养去除甘薯丛枝病植原体．西北农林科技大学学报(自然科学版)，2001，3：1-4．
[13] 赵军良．植物茎尖培养与无毒种苗生产．北方园艺，1995，6：10-11．
[14] 薛光荣，杨振英，洪霓，等．茎尖培养等处理脱除梨病毒的技术研究．中国果树，1996(3)：9-11．
[15] 徐启江，陈典，张云修．分蘗洋葱茎尖培养脱毒苗技术研究．西北农林科技大学学报，2002，30(2)：102-106．
[16] 宋瑞林，韦晓霞，吴如健，等．切花菊的番茄不孕病毒脱除技术研究[J]．福建农业学报，1999，14(1)：23-27．
[17] 陈菁瑛，杨辉，范国成，等．罗源厦门切花菊的病毒血清学的初步检测和脱毒技术研究[J]．福建农业学报，1997，13(4)：12-14．
[18] 刘华清．果树无病毒化栽培及脱毒技术应用[J]．福建果树，1997(3)：30-31．
[19] 覃兰英，李青，邓世秀，等．核果类病毒识别鉴定及脱毒技术[J]．北京农业科学，1997(10)：23-28．
[20] 江虎军，潘季淑，孟新法．桃茎尖培养技术的研究[J]．北京农业大学学报，1993，19(1)：49-52．
[21] Huang, Shu—Ching. In vitro micrograiting of Apple Shot tips[J]. Hortscience, 1980, 15(6):741-743.
[22] 宋瑞琳，吴如健，陈菁瑛，等．脱除柑桔碎叶病病毒的初步研究[J]．福建农业学报，
1994，9(1)：57-59．
[23] 宋瑞琳，吴如健，柯冲．茎尖嫁接脱除柑桔主要病原的研究[J]．植物病理学报，1999，29(3)：275-279．
[24] 蒋元晖，赵学源，苏维芳，等．通过茎尖嫁接脱除柑桔黄龙病病原体[J]．植物保护学报，1987，14(3)：184．
[25] 刘建雄，舒广平．柑桔茎尖嫁接脱除裂皮病技术研究[J]．湖南农业科学，1988，3：30-32
[26] Navarro L, Roistacher N C, Murshige T. Improvement of shoot-tip grafting in vitro for virus-free citrus[J]. Amer. Soc. Hort. Sci., 1975, 100(5): 471-479.
[27] Navarro L. Citrus shoot-tip grafting in vitro(STG) and its applications:a review Proc[J]. Int. Soc. Citriculture, 1981: 1:452-456.
[28] 王文和，邓馨，胡文玉，等．草莓叶片愈伤组织形成及再生芽分化的组织学研究[J]．沈阳农业大学学报1999，30(4)：430-433．
[29] 邓晓梅，周秀涛．铃兰愈伤组织诱导及芽的分化[J]．上海农业学报1998，14(1)：55-57．
[30] 何业华，伍成厚，胡中沂，等．枣树愈伤组织培养时不定芽的分化[J]．中南林学院学报，1998，18(3)：45-50．
[31] 朱西儒，张云开．番木瓜叶片愈伤组织形成、分化及再生植株移栽[J]．广西植物，2001，21(1)：59-62．
[32] 陈正华，顾淑荣，朱至清，等．白皮松和油松雌配子体愈伤组织的诱导和分化[J]．植物学报，1995，37(3)：217-221．
[33] 朱道于．软枣猕猴桃叶片愈伤组织再分化植株[J]．植物生理通讯，1992，2：127-128．
[34] 柳建军，于洪欣，冯兆礼．小麦成熟胚愈伤组织诱导及分化的研究[J]．山东农业大学学报，1996，27(4)：451-456．
[35] 阮小凤，杨勇，马书尚，等．甜樱桃病毒病的ELISA检测研究[J]．山东农业大学学报，1998，(3)：277-282．
[36] 谷洪昌，严敦余，刘焕庭．葡萄扇叶病毒的ELISA检测技术[J]．山东农业大学学报，1994，25(1)：82-85．
[37] 李青，覃兰英，李明福，等．酶联免疫法检测核果类果树病毒[J]．北京农业科学，1996，(4)：33-35．
[38] 马占鸿，李怀方，袭维蕃，等．玉米种子携带MDMV的检测[J]．玉米科学，1997，5(2)：73-76．
[39] 高文臣，魏宁生，吴云峰．甘蔗花叶病毒MDB株系传播特性的研究[J]．北京师范大学学报(自然科学版)，1999，35(1)：98-101．
[40] 霍书新，张小红．我国葡萄主要病毒病的鉴定方法[J]．北方果树，1997(1)：6-7．
[41] 黄遵锡，李红，施正丽．云南省几种主要烟草病毒病理特征的观察[J]．云南师范大学学
报，1997，17(2)：56-60．
[42] 裘文达．园艺植物组织培养[M]．上海：上海科学技术出版社，1986：103-104，106，123，129-131．
[43] 徐洁．指示植物鉴定马铃薯病毒技术的研究与应用[J]．中国马铃薯，2002，2：73-75．
[44] 吴雅琴．梨树主要病毒的检测方法[J]．河北果树，1997，2：5-6．
[45] 刘霞，田爱萍，姜书绅．马铃薯脱病毒技术应用及无病毒种薯繁殖[J]．陕西农业科学，1997(6)：40-41．
[46] 赵佐敏，艾勇．草莓脱毒技术的研究及应用进展[J]．贵州农业科学，2001，29(6)：50-52．
[47] 金开璇，等．泡桐丛枝病病原及传播途径的研究．林业科学，1978，14(4)
[48] 沈菊英．泡桐丛枝病病原的电子显微镜研究[J]．生物化学与生物物理学报，1980，12(2)：207-208．
[49] 郑文锋，等．泡桐丛枝病病原及传染途径的研究．林业科学，1990(1)：23-25．
[50] 丁正民，泡桐丛枝病的实验诊断[J]．上海农业学报，1987，3(2)：63-70．
[51] 金开璇，田国忠．组织化学技术快速检测泡桐丛枝病研究[J]．植物病理学报，1989，19(3)185-187．
[52] 何放亭，武红巾，陈子文．用DAPI荧光染色诊断植物类菌原体病害[J]．植物保护，1994，5：37．
[53] Deng S J, Hiruki C. Enhanced detection of a plant pathogenic mycoplasma like organisms by nolvmerrase chain reaction[J]. Japan Acad., 1990. 66B(7): 140-144.
[54] 胡学勤，林木兰，张春立，等．利用RT-PCR扩增和分析柑桔裂皮病类病毒[J]．植物学报，1997，39(7)：613-617．
[55] 曾凡济．PCR用于病毒学领域研究的现状[J]．病毒学杂志，1991，(2)：91-101．
[56] Mnafra A, Hadidi A, Martell G P. Detection of grapevine closterovirus A in infected grapevine tissue by RT-PCR[J]. Vitis, 1992, (31): 221-227.
[57] Esmeniaud D, Abda P. Detection of region of the coat protein gene of grapevine fanleaf virus by RT-PCR in the nematode vector xiphinema index[J]. Plant Disease, 1994, 78(11): 1087-1090.
[58] Nemechinov L, Hadidi A. PCR-detection of apple stem pitting virus from pome fruit hosts and sequence variability among viral isolates[J]. Acta Hort, 1998, 472:67-69.
[59] Parakh D R, Shamloul A M, Hadidi A, etal. Dtection of prune dwarfilarvirus from infected stone fruits using RT-PCR. Acta Horticulturae, 1995, 386:421-430.
[60] Malinowski T. Detection of apple stem pitting virus and pear vein yellow virus using reverse transcription polymetase chain reaction[J]. Acta Hort, 1998, 472: 87-95.
[61] Shamloul A M, Mnafra A, Hadidi A. Peach latent mosaic viroid: nucleotide of an italianisolate, sensitive detection using RT-PCR and geoggraphinc distribution[J]. Acta
Horticulturae, 1995, 386:522-535.
[62] Adib Rowhani, Chay C, Golino D A, etal. Development of a PCR technique for the detection of grapevine fanleaf virus in grapevine tissue[J]. Phytopathology, 1996, 87(7): 749-753.
[63] Rowhani A, Maningas M A, Lile L S, etal. Development of a detection system for virusesof woody paints based on PCR analysis of immobilized virions[J]. Phytopathology, 1995, 85(3): 347-352.
[64] 秦国夫，沈瑞祥．PCR检测树木菌原体的研究[J]．森林病虫通讯，1995，(2)：18-19．
[65] 王克日，庞辉．泡桐组培苗丛枝病体PCR检测[J]．林业科学研究，1995，8(2)：215-218．
[66] 彭于发，王慧敏，彭有良．植物病理学研究[M]．北京：中国农业出版社，1997．9-13．
[67] 中国农业科学院蔬菜研究所．中国蔬菜栽培学[M]．北京：农业出版社，1987：319-326．
[68] Salazar L, Roy A, Gomez L, Arias O. Detection of dasheen mosaic virus (DMV) by radioimmunoassay[J]. Agron Costarr, 1991, 15(1-2):151-155.
[69] Hu JS, Meleisea S, Wang M. Detection of dasheen mosaic virus from taro plants in the field and in tissue culture[J]. Plant disease, 1994, 78(7):754.
[70] Hu JS, Meleisea S, Wang M, etal. Dasheen mosaic potyvirus in Hawaiian taro[J]. Austral Plant Pathol, 1995, 24(2):112-117.
[71] Greber RS, Shaw DE. Dasheen mosaic virus in Queensland[J]. Austral Plant Pathol, 1986, 15(2):29-33.
[72] Zettle FW, Tsai JH, Faan HC, etal. Dasheen mosaic virus infecting taro in People's Republic of China[J]. Plant Disease, 1987, 71(9): 837-839.
[73] 柏新富，蒋小满，毕可华，等．芋脱毒苗的组培快繁及田间试验[J]．应用与环境生物学报，2002，8(1)：52-55．
[74] 张作生，赵永云，孔凡来，等．苹果脱毒苗早期丰产优质栽培试验[J]．落叶果树，1994(增刊)：13-14．
[75] Walkey D G A. Production of virus-free plant. In: Tseng C K ed. Applied plant virology[J]. New York: Science Press, 1991,270-290
[76] Kawarabayashi W, Asahira T. In vitro Multiplication of virus-free bublbs of Lilies[J]. Japan Soc Hort Sci, 1989, 58: 195-209.
[77] 徐品三，栾雨时，刘纪文，等．百合不定芽培养脱毒种球生产的研究[J]．植物学通报，2003，20(3)：313～318．
[78] 孔德广，陈桂华，袁新华．泡桐组培脱毒苗田间育苗、造林及防治丛枝病效果的研究[J]．林业科技通讯，1998，6：22-23．
[79] 吴涛，朱玉灵，赵红，等．皖薯1号的脱毒技术和脱毒苗的增产效果[J]．安徽农业科学，1999，27(6)：546-547．
[80] 张明厚，魏培文，朱俊华，等．大蒜茎尖组培苗的检测[J]．东北农业大学学报，1999，30(2)：105-110．
[81] 邢继英，孙爱根，胡兰英，等．甘薯脱毒种薯连年使用后的病毒侵染情况及产量变化[J]．江苏农业科学，1999，6：47-48．
[82] 宋润刚，路文鹏，王军，等．山葡萄品种脱毒苗遗传稳定性及其生产性能的研究[J]．园艺学报，1999，26(3)：191-193．
[83] 李浚明，编译．植物组织培养教程[M]．北京：中国农业大学出版社，2000：319．
[84] Thomson. Heat treatment and tissue culture as a means of freeing potatoes from virus[J]. Nature, 1977: 709.
[85] 陶国清，等．马铃薯无病毒植株大量繁殖和栽培[J]．植物学报，1981，23(1)：75-78．
[86] 黄楚材，等．茎尖培养马铃薯“双季一号”获得无病毒植株的研究[J]．马铃薯，1980，1：4-7．
[87] 陈世儒，黄菊辉．大蒜离体快速繁殖及脱毒[J]．园艺学报，1991，18(37)：245-250．
[88] 尚佑芬，杨崇良甘薯茎尖脱毒研究[J]．植物保护，1996，22(5)：14-16．
[89] 徐丽娟，曲善硼，王采石，等．切花菊快速繁殖研究[J]．莱阳农学院学报，1997，14(2)：123-125．
[90] 蔡祝南，杨莉莉，彭超美，等．切花菊脱毒及脱毒苗的检测[J]，植物病理学报，1992，22(1)：34．
[91] 张健如，沈淑琳．花卉病毒鉴定手册[M]．1984：54-64．
[92] Ben jaacov. J. Langhans R.W. Rapid multiplication of Chrysanthemum plants by stem tip proliferation[J]. Hort. Science, 1972, 7(7): 289.
[93] 裘文达，李曙轩，等．菊花名贵品种组织培养快速繁殖的研究[J]．浙江农业大学学报，1983，9(2)：105-114．
[94] 王怀宇，陈明昭，李汉强，等．菊花丽金的快速繁殖研究初报[J]．广东园林，1983，4：25-27．
[95] 黄济明．用菊花花辦进行组织培养以促使花色变异[J]．自然杂志，1984，1：77-78．
[96] 司怀军，戴朝曦，于品华，等．菊花幼嫩花辦愈伤组织的诱导和植株再生[J]．甘肃农业大学学报，1998，33(2)：175-177．
[97] 叶小曲，沈效东，张新宇，等．植物激素对菊花试管苗快速繁殖的影响[J]．宁夏农林科技，1999，3：32．
[98] 蔡健和，朱西儒．几种菊的病毒病原的鉴定[J]．广西农业科学．1994，(6)：282-283．
[99] 舒秀珍，朱水芳，胡伟珍，等．侵染菊花和风信子的番茄不孕病毒的鉴定[J]．病毒学杂志，1990，(2)：186-192．
[100] 谷麻正义，井上忠南．热处理对菊花病毒病的作用(初报)[J]．日本病报，1968，34(5)：384．
[101] 舒秀珍，朱水芳，许宏冠，等．菊花病毒的鉴定及其检测技术的研究[J]．花卉病毒研究，1990(6)：1-10．
[102] 宋瑞林，韦晓霞，吴如健，等．切花菊的番茄不孕病毒脱除技术研究[J]．福建农业学
报，1999，14(1)：23-27．
[103] 许宏冠，舒秀珍，朱水芳，等，利用菊花茎尖再生脱毒植株、植物检疫研究报告[J]．花卉病毒研究，1990(3)：11-15．
[104] Hakkart AF and Quak E Effect of Heat treatment of Young plants on frying Chrysanthemum from virus B by means of meristem culture. Neth. [J]. Plant Poth. 1964, (70):154-157.
[105] 师校欣，马宝焜．河南海棠的组织培养[J]．植物生理学通讯，1992，28(2)：133-134．
[106] 何水涛，刘沛镇．苹果茎顶培养脱毒技术的研究[J]．河南农业科学，1996(11)：25-28．
[107] 林治良，陈振光．罗汉果无花叶病苗的培育[J]．福建农业大学学报，1995，24(2)：162-166．
[108] 田砚亭，王红艳，牛辰．枣树脱除类菌原体(MLO)技术的研究[J]．北京林业大学学报，1993，15(2)：20-26．
[109] 任东植，徐兆飞，王文琪，等．优质脱毒枣苗工厂化育苗技术研究[J]．华北农学报，1998，13(3)：137-140．
[110] 陈宗礼，薛皓，延志莲，等．红枣脱毒试管苗无性系建立的研究[J]．西北农业学报，2001，10(1)：17-21．
[111] 朱文勇，杜学梅，郭黄萍，等．骏枣茎尖培养脱除枣疯病MLO[J]，园艺学报，1996，23(2)197-198．
[112] 戴洪义．枣疯病热处理脱毒的初步研究[J]．落叶果树，1998，(4)：1-2．
[113] 张健如，沈淑琳．花卉植物病毒及病毒病[M]．上海科学技术出版社，1991．2，225～229．
[114] Whitlock V H. Tulip Breaking Virus and Tobacco Rattle Virus Isolated from Infected Tulipsin South Africa[J]. Plant Disease, 1984, 68: 351.
[115] 方中达．植病研究方法[M]．北京：农业出版社，1982：245-247．
[116] 梁一池，杨华．植物组织培养技术的研究进展[J]．福建林业院学报，2002，22(1)：1-3．
[117] 卜学贤，陈维伦．试管植物的玻璃化现象[J]．植物生理学通讯，1987，5：13-18．
[118] 吴若菁，尤华明，彭东辉．香石竹组培苗玻璃化控制的研究[J]，福建林学院学报，1995，15(4)：360-363．
[119] 孔宝华，蔡红，刘进元，等．香石竹斑驳病毒的鉴定和RT-PCR检测[J]．植物保护，2002，28(1)：5-8．
[2] 张锡津，田国忠，李江山．泡桐组织培养脱毒技术[J]．林业科技通讯，1994，2：30
[3] 孙朝晖，温秀军，孙士学．枣疯病研究现状．河北林业科技[J]．1998，2：50-53．
[4] 朱本明．泡桐丛枝病研究现状[J]．山东林业科技，1986，2：1-6．
[5] 河南许昌地区林科所，泡桐丛枝病研究进展[J]．许昌林业，1981，1-13．
[6] 张学武，宋晓斌，郑文锋，我国泡桐丛枝病育种研究进展[J]．陕西林业科技，1995，3：57-60．
[7] 周俊义，刘孟军，侯保林．枣疯病研究进展[J]．果树科学，1998，15(4)：354-355．
[8] 李云主编．林果花菜组织培养快速育苗技术[M]．北京：中国林业出版社，2003：109．
[9] 郑平，张雄坚，陈应东，等．广东甘薯组培脱毒苗田间比较试验初报[J]．广东农业科学，1991，5：12-14．
[10] 杭玲，潘颖南，黄卓忠，等．革莓匍匐茎尖组织培养与脱毒苗生产[J]．广西林业科学，1999，6：319-320．
[11] 崔月花，张彪，高红明，等．唐菖蒲茎尖培养脱病毒的研究．江苏农业研究，2000，21(4)：88-89．
[12] 兰平，李文凤，朱水芳，等．热处理结合茎尖培养去除甘薯丛枝病植原体．西北农林科技大学学报(自然科学版)，2001，3：1-4．
[13] 赵军良．植物茎尖培养与无毒种苗生产．北方园艺，1995，6：10-11．
[14] 薛光荣，杨振英，洪霓，等．茎尖培养等处理脱除梨病毒的技术研究．中国果树，1996(3)：9-11．
[15] 徐启江，陈典，张云修．分蘗洋葱茎尖培养脱毒苗技术研究．西北农林科技大学学报，2002，30(2)：102-106．
[16] 宋瑞林，韦晓霞，吴如健，等．切花菊的番茄不孕病毒脱除技术研究[J]．福建农业学报，1999，14(1)：23-27．
[17] 陈菁瑛，杨辉，范国成，等．罗源厦门切花菊的病毒血清学的初步检测和脱毒技术研究[J]．福建农业学报，1997，13(4)：12-14．
[18] 刘华清．果树无病毒化栽培及脱毒技术应用[J]．福建果树，1997(3)：30-31．
[19] 覃兰英，李青，邓世秀，等．核果类病毒识别鉴定及脱毒技术[J]．北京农业科学，1997(10)：23-28．
[20] 江虎军，潘季淑，孟新法．桃茎尖培养技术的研究[J]．北京农业大学学报，1993，19(1)：49-52．
[21] Huang, Shu—Ching. In vitro micrograiting of Apple Shot tips[J]. Hortscience, 1980, 15(6):741-743.
[22] 宋瑞琳，吴如健，陈菁瑛，等．脱除柑桔碎叶病病毒的初步研究[J]．福建农业学报，
1994，9(1)：57-59．
[23] 宋瑞琳，吴如健，柯冲．茎尖嫁接脱除柑桔主要病原的研究[J]．植物病理学报，1999，29(3)：275-279．
[24] 蒋元晖，赵学源，苏维芳，等．通过茎尖嫁接脱除柑桔黄龙病病原体[J]．植物保护学报，1987，14(3)：184．
[25] 刘建雄，舒广平．柑桔茎尖嫁接脱除裂皮病技术研究[J]．湖南农业科学，1988，3：30-32
[26] Navarro L, Roistacher N C, Murshige T. Improvement of shoot-tip grafting in vitro for virus-free citrus[J]. Amer. Soc. Hort. Sci., 1975, 100(5): 471-479.
[27] Navarro L. Citrus shoot-tip grafting in vitro(STG) and its applications:a review Proc[J]. Int. Soc. Citriculture, 1981: 1:452-456.
[28] 王文和，邓馨，胡文玉，等．草莓叶片愈伤组织形成及再生芽分化的组织学研究[J]．沈阳农业大学学报1999，30(4)：430-433．
[29] 邓晓梅，周秀涛．铃兰愈伤组织诱导及芽的分化[J]．上海农业学报1998，14(1)：55-57．
[30] 何业华，伍成厚，胡中沂，等．枣树愈伤组织培养时不定芽的分化[J]．中南林学院学报，1998，18(3)：45-50．
[31] 朱西儒，张云开．番木瓜叶片愈伤组织形成、分化及再生植株移栽[J]．广西植物，2001，21(1)：59-62．
[32] 陈正华，顾淑荣，朱至清，等．白皮松和油松雌配子体愈伤组织的诱导和分化[J]．植物学报，1995，37(3)：217-221．
[33] 朱道于．软枣猕猴桃叶片愈伤组织再分化植株[J]．植物生理通讯，1992，2：127-128．
[34] 柳建军，于洪欣，冯兆礼．小麦成熟胚愈伤组织诱导及分化的研究[J]．山东农业大学学报，1996，27(4)：451-456．
[35] 阮小凤，杨勇，马书尚，等．甜樱桃病毒病的ELISA检测研究[J]．山东农业大学学报，1998，(3)：277-282．
[36] 谷洪昌，严敦余，刘焕庭．葡萄扇叶病毒的ELISA检测技术[J]．山东农业大学学报，1994，25(1)：82-85．
[37] 李青，覃兰英，李明福，等．酶联免疫法检测核果类果树病毒[J]．北京农业科学，1996，(4)：33-35．
[38] 马占鸿，李怀方，袭维蕃，等．玉米种子携带MDMV的检测[J]．玉米科学，1997，5(2)：73-76．
[39] 高文臣，魏宁生，吴云峰．甘蔗花叶病毒MDB株系传播特性的研究[J]．北京师范大学学报(自然科学版)，1999，35(1)：98-101．
[40] 霍书新，张小红．我国葡萄主要病毒病的鉴定方法[J]．北方果树，1997(1)：6-7．
[41] 黄遵锡，李红，施正丽．云南省几种主要烟草病毒病理特征的观察[J]．云南师范大学学
报，1997，17(2)：56-60．
[42] 裘文达．园艺植物组织培养[M]．上海：上海科学技术出版社，1986：103-104，106，123，129-131．
[43] 徐洁．指示植物鉴定马铃薯病毒技术的研究与应用[J]．中国马铃薯，2002，2：73-75．
[44] 吴雅琴．梨树主要病毒的检测方法[J]．河北果树，1997，2：5-6．
[45] 刘霞，田爱萍，姜书绅．马铃薯脱病毒技术应用及无病毒种薯繁殖[J]．陕西农业科学，1997(6)：40-41．
[46] 赵佐敏，艾勇．草莓脱毒技术的研究及应用进展[J]．贵州农业科学，2001，29(6)：50-52．
[47] 金开璇，等．泡桐丛枝病病原及传播途径的研究．林业科学，1978，14(4)
[48] 沈菊英．泡桐丛枝病病原的电子显微镜研究[J]．生物化学与生物物理学报，1980，12(2)：207-208．
[49] 郑文锋，等．泡桐丛枝病病原及传染途径的研究．林业科学，1990(1)：23-25．
[50] 丁正民，泡桐丛枝病的实验诊断[J]．上海农业学报，1987，3(2)：63-70．
[51] 金开璇，田国忠．组织化学技术快速检测泡桐丛枝病研究[J]．植物病理学报，1989，19(3)185-187．
[52] 何放亭，武红巾，陈子文．用DAPI荧光染色诊断植物类菌原体病害[J]．植物保护，1994，5：37．
[53] Deng S J, Hiruki C. Enhanced detection of a plant pathogenic mycoplasma like organisms by nolvmerrase chain reaction[J]. Japan Acad., 1990. 66B(7): 140-144.
[54] 胡学勤，林木兰，张春立，等．利用RT-PCR扩增和分析柑桔裂皮病类病毒[J]．植物学报，1997，39(7)：613-617．
[55] 曾凡济．PCR用于病毒学领域研究的现状[J]．病毒学杂志，1991，(2)：91-101．
[56] Mnafra A, Hadidi A, Martell G P. Detection of grapevine closterovirus A in infected grapevine tissue by RT-PCR[J]. Vitis, 1992, (31): 221-227.
[57] Esmeniaud D, Abda P. Detection of region of the coat protein gene of grapevine fanleaf virus by RT-PCR in the nematode vector xiphinema index[J]. Plant Disease, 1994, 78(11): 1087-1090.
[58] Nemechinov L, Hadidi A. PCR-detection of apple stem pitting virus from pome fruit hosts and sequence variability among viral isolates[J]. Acta Hort, 1998, 472:67-69.
[59] Parakh D R, Shamloul A M, Hadidi A, etal. Dtection of prune dwarfilarvirus from infected stone fruits using RT-PCR. Acta Horticulturae, 1995, 386:421-430.
[60] Malinowski T. Detection of apple stem pitting virus and pear vein yellow virus using reverse transcription polymetase chain reaction[J]. Acta Hort, 1998, 472: 87-95.
[61] Shamloul A M, Mnafra A, Hadidi A. Peach latent mosaic viroid: nucleotide of an italianisolate, sensitive detection using RT-PCR and geoggraphinc distribution[J]. Acta
Horticulturae, 1995, 386:522-535.
[62] Adib Rowhani, Chay C, Golino D A, etal. Development of a PCR technique for the detection of grapevine fanleaf virus in grapevine tissue[J]. Phytopathology, 1996, 87(7): 749-753.
[63] Rowhani A, Maningas M A, Lile L S, etal. Development of a detection system for virusesof woody paints based on PCR analysis of immobilized virions[J]. Phytopathology, 1995, 85(3): 347-352.
[64] 秦国夫，沈瑞祥．PCR检测树木菌原体的研究[J]．森林病虫通讯，1995，(2)：18-19．
[65] 王克日，庞辉．泡桐组培苗丛枝病体PCR检测[J]．林业科学研究，1995，8(2)：215-218．
[66] 彭于发，王慧敏，彭有良．植物病理学研究[M]．北京：中国农业出版社，1997．9-13．
[67] 中国农业科学院蔬菜研究所．中国蔬菜栽培学[M]．北京：农业出版社，1987：319-326．
[68] Salazar L, Roy A, Gomez L, Arias O. Detection of dasheen mosaic virus (DMV) by radioimmunoassay[J]. Agron Costarr, 1991, 15(1-2):151-155.
[69] Hu JS, Meleisea S, Wang M. Detection of dasheen mosaic virus from taro plants in the field and in tissue culture[J]. Plant disease, 1994, 78(7):754.
[70] Hu JS, Meleisea S, Wang M, etal. Dasheen mosaic potyvirus in Hawaiian taro[J]. Austral Plant Pathol, 1995, 24(2):112-117.
[71] Greber RS, Shaw DE. Dasheen mosaic virus in Queensland[J]. Austral Plant Pathol, 1986, 15(2):29-33.
[72] Zettle FW, Tsai JH, Faan HC, etal. Dasheen mosaic virus infecting taro in People's Republic of China[J]. Plant Disease, 1987, 71(9): 837-839.
[73] 柏新富，蒋小满，毕可华，等．芋脱毒苗的组培快繁及田间试验[J]．应用与环境生物学报，2002，8(1)：52-55．
[74] 张作生，赵永云，孔凡来，等．苹果脱毒苗早期丰产优质栽培试验[J]．落叶果树，1994(增刊)：13-14．
[75] Walkey D G A. Production of virus-free plant. In: Tseng C K ed. Applied plant virology[J]. New York: Science Press, 1991,270-290
[76] Kawarabayashi W, Asahira T. In vitro Multiplication of virus-free bublbs of Lilies[J]. Japan Soc Hort Sci, 1989, 58: 195-209.
[77] 徐品三，栾雨时，刘纪文，等．百合不定芽培养脱毒种球生产的研究[J]．植物学通报，2003，20(3)：313～318．
[78] 孔德广，陈桂华，袁新华．泡桐组培脱毒苗田间育苗、造林及防治丛枝病效果的研究[J]．林业科技通讯，1998，6：22-23．
[79] 吴涛，朱玉灵，赵红，等．皖薯1号的脱毒技术和脱毒苗的增产效果[J]．安徽农业科学，1999，27(6)：546-547．
[80] 张明厚，魏培文，朱俊华，等．大蒜茎尖组培苗的检测[J]．东北农业大学学报，1999，30(2)：105-110．
[81] 邢继英，孙爱根，胡兰英，等．甘薯脱毒种薯连年使用后的病毒侵染情况及产量变化[J]．江苏农业科学，1999，6：47-48．
[82] 宋润刚，路文鹏，王军，等．山葡萄品种脱毒苗遗传稳定性及其生产性能的研究[J]．园艺学报，1999，26(3)：191-193．
[83] 李浚明，编译．植物组织培养教程[M]．北京：中国农业大学出版社，2000：319．
[84] Thomson. Heat treatment and tissue culture as a means of freeing potatoes from virus[J]. Nature, 1977: 709.
[85] 陶国清，等．马铃薯无病毒植株大量繁殖和栽培[J]．植物学报，1981，23(1)：75-78．
[86] 黄楚材，等．茎尖培养马铃薯“双季一号”获得无病毒植株的研究[J]．马铃薯，1980，1：4-7．
[87] 陈世儒，黄菊辉．大蒜离体快速繁殖及脱毒[J]．园艺学报，1991，18(37)：245-250．
[88] 尚佑芬，杨崇良甘薯茎尖脱毒研究[J]．植物保护，1996，22(5)：14-16．
[89] 徐丽娟，曲善硼，王采石，等．切花菊快速繁殖研究[J]．莱阳农学院学报，1997，14(2)：123-125．
[90] 蔡祝南，杨莉莉，彭超美，等．切花菊脱毒及脱毒苗的检测[J]，植物病理学报，1992，22(1)：34．
[91] 张健如，沈淑琳．花卉病毒鉴定手册[M]．1984：54-64．
[92] Ben jaacov. J. Langhans R.W. Rapid multiplication of Chrysanthemum plants by stem tip proliferation[J]. Hort. Science, 1972, 7(7): 289.
[93] 裘文达，李曙轩，等．菊花名贵品种组织培养快速繁殖的研究[J]．浙江农业大学学报，1983，9(2)：105-114．
[94] 王怀宇，陈明昭，李汉强，等．菊花丽金的快速繁殖研究初报[J]．广东园林，1983，4：25-27．
[95] 黄济明．用菊花花辦进行组织培养以促使花色变异[J]．自然杂志，1984，1：77-78．
[96] 司怀军，戴朝曦，于品华，等．菊花幼嫩花辦愈伤组织的诱导和植株再生[J]．甘肃农业大学学报，1998，33(2)：175-177．
[97] 叶小曲，沈效东，张新宇，等．植物激素对菊花试管苗快速繁殖的影响[J]．宁夏农林科技，1999，3：32．
[98] 蔡健和，朱西儒．几种菊的病毒病原的鉴定[J]．广西农业科学．1994，(6)：282-283．
[99] 舒秀珍，朱水芳，胡伟珍，等．侵染菊花和风信子的番茄不孕病毒的鉴定[J]．病毒学杂志，1990，(2)：186-192．
[100] 谷麻正义，井上忠南．热处理对菊花病毒病的作用(初报)[J]．日本病报，1968，34(5)：384．
[101] 舒秀珍，朱水芳，许宏冠，等．菊花病毒的鉴定及其检测技术的研究[J]．花卉病毒研究，1990(6)：1-10．
[102] 宋瑞林，韦晓霞，吴如健，等．切花菊的番茄不孕病毒脱除技术研究[J]．福建农业学
报，1999，14(1)：23-27．
[103] 许宏冠，舒秀珍，朱水芳，等，利用菊花茎尖再生脱毒植株、植物检疫研究报告[J]．花卉病毒研究，1990(3)：11-15．
[104] Hakkart AF and Quak E Effect of Heat treatment of Young plants on frying Chrysanthemum from virus B by means of meristem culture. Neth. [J]. Plant Poth. 1964, (70):154-157.
[105] 师校欣，马宝焜．河南海棠的组织培养[J]．植物生理学通讯，1992，28(2)：133-134．
[106] 何水涛，刘沛镇．苹果茎顶培养脱毒技术的研究[J]．河南农业科学，1996(11)：25-28．
[107] 林治良，陈振光．罗汉果无花叶病苗的培育[J]．福建农业大学学报，1995，24(2)：162-166．
[108] 田砚亭，王红艳，牛辰．枣树脱除类菌原体(MLO)技术的研究[J]．北京林业大学学报，1993，15(2)：20-26．
[109] 任东植，徐兆飞，王文琪，等．优质脱毒枣苗工厂化育苗技术研究[J]．华北农学报，1998，13(3)：137-140．
[110] 陈宗礼，薛皓，延志莲，等．红枣脱毒试管苗无性系建立的研究[J]．西北农业学报，2001，10(1)：17-21．
[111] 朱文勇，杜学梅，郭黄萍，等．骏枣茎尖培养脱除枣疯病MLO[J]，园艺学报，1996，23(2)197-198．
[112] 戴洪义．枣疯病热处理脱毒的初步研究[J]．落叶果树，1998，(4)：1-2．
[113] 张健如，沈淑琳．花卉植物病毒及病毒病[M]．上海科学技术出版社，1991．2，225～229．
[114] Whitlock V H. Tulip Breaking Virus and Tobacco Rattle Virus Isolated from Infected Tulipsin South Africa[J]. Plant Disease, 1984, 68: 351.
[115] 方中达．植病研究方法[M]．北京：农业出版社，1982：245-247．
[116] 梁一池，杨华．植物组织培养技术的研究进展[J]．福建林业院学报，2002，22(1)：1-3．
[117] 卜学贤，陈维伦．试管植物的玻璃化现象[J]．植物生理学通讯，1987，5：13-18．
[118] 吴若菁，尤华明，彭东辉．香石竹组培苗玻璃化控制的研究[J]，福建林学院学报，1995，15(4)：360-363．
[119] 孔宝华，蔡红，刘进元，等．香石竹斑驳病毒的鉴定和RT-PCR检测[J]．植物保护，2002，28(1)：5-8．