毛白杨试管苗耐盐性分析及耐盐植株初选
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摘要
毛白杨(Populus tomentosa Carr．)是我国特有的乡土树种，具有许多优良特性，如适应性强，生长周期短，木材质量高等。然而它在NaCl含量超过0.3％的土壤中不能正常生长。这也是影响毛白杨在我国大面积推广的主要原因之一。在毛白杨原有优良性状的基础上，利用组织培养技术，通过体细胞变异培育耐盐品种是解决抗性造林树种的重要途径。
本文在建立了三倍体毛白杨叶片、愈伤组织高频率分化能力的基础上，以三倍体毛白杨离体苗为材料，通过一步选择程序，对三倍体毛白杨试管苗、叶片分化形成的不定芽、愈伤组织进行耐盐性分析，试验结果发现，在不同浓度NaCl中，试管苗生长、叶片分化和愈伤组织生长都受到了不同程度的抑制作用，但他们在不同浓度的NaCl中敏感性不同，叶片分化不定芽时对NaCl的敏感性比较强烈，NaCl浓度为0.3％时，叶片分化受到了明显的抑制作用，而试管苗和愈伤组织的敏感性次之，它们都能够在0.2-0.4％NaCl浓度下较为正常的地生长，且随着盐浓度的增加生长量还有一定提高。
在分析了它们的耐盐性基础上，以0.2％NaCl为起始浓度，逐级加盐，经有盐无盐多次连续选择，获得由叶片和愈伤组织分化形成的耐NaCl0.35％、0.4％的三倍体毛白杨耐盐植株。对叶片分化的耐盐植株进行生理生化指标测定，结果发现，获得的耐盐植株的脯氨酸含量和MDA含量均高于对照，而且随着盐浓度的升高，脯氨酸含量和MDA含量逐渐增加。
另取部分离体叶片进行γ射线辐照处理，试验发现，辐照处理对叶片分化率影响很大，在一定剂量范围内，随着吸收剂量的增加，叶片分化率逐渐提高，吸收剂量为10Gy时分化率最高，叶片分化率为67.11％，是对照的1.5倍。继续提高吸收剂量，分化率增加的幅度逐渐降低；当吸收剂量为30Gy时，分化率低于对照，随着吸收剂量继续升高，其分化率大幅度下降。对辐照处理的叶片分化苗进行耐盐性分析，发现辐照之后形成的植株在盐胁迫下生长高度均比不进行任何处理和直接加盐的两个对照要高，说明辐照处理能够减轻NaCl对苗的伤害，提高苗的耐盐性，促进三倍体毛白杨耐盐植株的筛选。
Populus tomentosa is one of the indigenous tree species which exhibits many excellent characteristics such as broad adaptability to environment, short growth period and high quality wood. But it can't grow normally when the concentrations of salt attain to 0.3% in soil. That was one of reasons why the distribution of P. tomentosa was confined. Based on the many excellent characteristics of P. tomentosa , selection of salt-tolerant variants was an important method to breed new clones with improved resistance to salt by somatic variation from culture in vitro o
Based on the high differentiating rate of leaves and callus, the Salt-tolerant characteristics of shoots leaves and callus of tube plants from triploid P. tomentosa Carr. were analysed by one-stepped procedure. Growth of shoots leaves differentiating and inducing callus were inhibited in the media containing NaCl, but their sensitivities to NaCl were different. Sensitivity of leaf was stronger than the others, there's no differentiation in the media containing NaCl 0.4%, differentiating rate of leaves in the media containing NaCl 0.3% has obviously change, therefore the media of NaCl 0.3% was the suitable selection media for leaf differentiation. But sensitivities of plantlet and callus were not stronger than that of leaf, they can grow normally in the media of NaCl 0.4%, growth raised within the media of NaCl 0.4% and sharply declined beyond the range. On the base of analysing their salt-tolerant characteristics, NaCl 0.2% was thought as the initial concentration, increasing NaCl concentration step by step
and more times selection in the salt and non-salt media, Salt-tolerant plants which can endure NaCl 0.35% and 0.4% from leaves differentiating and callus regenerating were obtained. The physiology and biochemistry indexes of the plants from leaf differentiating were measured, the result indicated proline and MDA contents were increasing with NaCl concentration increasing.
Additionally, other leaves were irradiated by Y rays, The result indicated irradiation treatment has strongly effection on leaf differentiation. The differentiating rate raised with irradiation dose increasing within some range, when
irradiation dose was lOGy, differentiating rate was the highest, differentiating rate was 67.11% and was 1.5 times that of the control. Continuing to raise irradiation dose, increasing range of leaf differentiating rate increasingly declined, when irradiation dose was 30Gy, differentiating rate was lower than that of control, irradiation dose was 50 Gy, differentiating rate was 0. Plants from leaf differentiating by 20 Gy irradiation treatment were inoculated to the media of NaCl 0.3% and successively cultured three periods, then transferred to non -salt media for one period and once added to the media containing different concentration NaCl. The result indicated plant growth by irradiation treatment in salt stress was higher than the control and directly being added to salt , It showed irradiation can alleviate salt harm on plant . Irradiation can enhance salt- tolerant characteristics and benefit for selection of salt-tolerant variants.
本文在建立了三倍体毛白杨叶片、愈伤组织高频率分化能力的基础上，以三倍体毛白杨离体苗为材料，通过一步选择程序，对三倍体毛白杨试管苗、叶片分化形成的不定芽、愈伤组织进行耐盐性分析，试验结果发现，在不同浓度NaCl中，试管苗生长、叶片分化和愈伤组织生长都受到了不同程度的抑制作用，但他们在不同浓度的NaCl中敏感性不同，叶片分化不定芽时对NaCl的敏感性比较强烈，NaCl浓度为0.3％时，叶片分化受到了明显的抑制作用，而试管苗和愈伤组织的敏感性次之，它们都能够在0.2-0.4％NaCl浓度下较为正常的地生长，且随着盐浓度的增加生长量还有一定提高。
在分析了它们的耐盐性基础上，以0.2％NaCl为起始浓度，逐级加盐，经有盐无盐多次连续选择，获得由叶片和愈伤组织分化形成的耐NaCl0.35％、0.4％的三倍体毛白杨耐盐植株。对叶片分化的耐盐植株进行生理生化指标测定，结果发现，获得的耐盐植株的脯氨酸含量和MDA含量均高于对照，而且随着盐浓度的升高，脯氨酸含量和MDA含量逐渐增加。
另取部分离体叶片进行γ射线辐照处理，试验发现，辐照处理对叶片分化率影响很大，在一定剂量范围内，随着吸收剂量的增加，叶片分化率逐渐提高，吸收剂量为10Gy时分化率最高，叶片分化率为67.11％，是对照的1.5倍。继续提高吸收剂量，分化率增加的幅度逐渐降低；当吸收剂量为30Gy时，分化率低于对照，随着吸收剂量继续升高，其分化率大幅度下降。对辐照处理的叶片分化苗进行耐盐性分析，发现辐照之后形成的植株在盐胁迫下生长高度均比不进行任何处理和直接加盐的两个对照要高，说明辐照处理能够减轻NaCl对苗的伤害，提高苗的耐盐性，促进三倍体毛白杨耐盐植株的筛选。
Populus tomentosa is one of the indigenous tree species which exhibits many excellent characteristics such as broad adaptability to environment, short growth period and high quality wood. But it can't grow normally when the concentrations of salt attain to 0.3% in soil. That was one of reasons why the distribution of P. tomentosa was confined. Based on the many excellent characteristics of P. tomentosa , selection of salt-tolerant variants was an important method to breed new clones with improved resistance to salt by somatic variation from culture in vitro o
Based on the high differentiating rate of leaves and callus, the Salt-tolerant characteristics of shoots leaves and callus of tube plants from triploid P. tomentosa Carr. were analysed by one-stepped procedure. Growth of shoots leaves differentiating and inducing callus were inhibited in the media containing NaCl, but their sensitivities to NaCl were different. Sensitivity of leaf was stronger than the others, there's no differentiation in the media containing NaCl 0.4%, differentiating rate of leaves in the media containing NaCl 0.3% has obviously change, therefore the media of NaCl 0.3% was the suitable selection media for leaf differentiation. But sensitivities of plantlet and callus were not stronger than that of leaf, they can grow normally in the media of NaCl 0.4%, growth raised within the media of NaCl 0.4% and sharply declined beyond the range. On the base of analysing their salt-tolerant characteristics, NaCl 0.2% was thought as the initial concentration, increasing NaCl concentration step by step
and more times selection in the salt and non-salt media, Salt-tolerant plants which can endure NaCl 0.35% and 0.4% from leaves differentiating and callus regenerating were obtained. The physiology and biochemistry indexes of the plants from leaf differentiating were measured, the result indicated proline and MDA contents were increasing with NaCl concentration increasing.
Additionally, other leaves were irradiated by Y rays, The result indicated irradiation treatment has strongly effection on leaf differentiation. The differentiating rate raised with irradiation dose increasing within some range, when
irradiation dose was lOGy, differentiating rate was the highest, differentiating rate was 67.11% and was 1.5 times that of the control. Continuing to raise irradiation dose, increasing range of leaf differentiating rate increasingly declined, when irradiation dose was 30Gy, differentiating rate was lower than that of control, irradiation dose was 50 Gy, differentiating rate was 0. Plants from leaf differentiating by 20 Gy irradiation treatment were inoculated to the media of NaCl 0.3% and successively cultured three periods, then transferred to non -salt media for one period and once added to the media containing different concentration NaCl. The result indicated plant growth by irradiation treatment in salt stress was higher than the control and directly being added to salt , It showed irradiation can alleviate salt harm on plant . Irradiation can enhance salt- tolerant characteristics and benefit for selection of salt-tolerant variants.
引文
1．陈火英，张建华，张晓宁．栽培番茄耐盐突变体的离体筛选．上海交通大学学报(农业科学版)，2002，20(1)：1-6
2．陈可咏，叶和春，陈建林，等．芦苇耐盐变异植株及其细胞学鉴定．植物学报，1994，36(12)：930-933
3．陈受宜，朱立煌，洪建，等．水稻耐盐突变体分子生物学鉴定．植物学报，1991，33(8)：569-573
4．戴伟民，赵艳，蔡润，等．番茄耐盐愈伤组织的筛选及显微结构观察．上海交通大学学报(农业科学版)，2001，19(2)：112-116
5．杜立群，李银心，李宏杰，等．在1/3海水培养基上筛选豆瓣菜耐盐突变体．植物学报，1999，41(6)：633-639
6．冯桂苓，谢兆印，杨文珍，等．水稻成熟胚愈伤组织耐盐变异体的筛选．天津农业科学，1996，(3)：6-8
7．谷祝平，郑国昌．快中子辐射诱变和盐培养基选择红豆草耐盐耐盐愈伤组织变异系的研究．生物工程学报，1991，7(1)：72-76
8．郭朝辰．杨树抗盐性及其在盐渍土上的生理过程．陕西林业科技，1990，21(3)：14-16
9．郭房庆，李群，顾瑞琦．抗盐小麦突变体的诱变筛选及其抗盐性的比较．核农学报，1997，11(1)：1-8
10．郭岩，陈少麟，张耕耘，等．应用细胞工程获得受主效应基因控制的水稻耐盐突变系．遗传学报，1997，24(2)：122-126
11．韩锦峰．植物生理生化．北京：高等教育出版社，1990
12．李爱贤，刘庆昌，王玉萍，等．甘薯耐旱、耐盐突变体的离体筛选．农业生物技术学报，2002，10(1)：15-19
13．李春兰，侯全民，曾令和，等．辐射诱变与组织培养相结合诱导小麦耐盐细胞系初探．核农学通报，1990，11(1)：8-12
14．李驹，陈维明．杨树耐盐细胞系的筛选及不定苗再生的研究．林业科技通讯，1984，(1)：1-3．
15．李玲，韩一凡．杨树耐盐变异体的筛选．林业科学，1990，26(4)：359-362
16．李周岐，邱明光，杨秀平．河北杨体细胞抗盐性变异系氨基酸组分变异性分析．陕西林业科技，1995，(3)：7-10
17．李周岐．高等植物体细胞突变体离体筛选技术及其在林木抗盐育种上的应用．陕西林业科技，1994，(4)：50-55
18．刘功弼．柑桔精简组织培养及其人工诱变初报．园艺学报，1983，10(4)：277-280
19．刘艳芝，庄炳昌，赵桂兰，等．大豆子叶节组培耐盐突变体筛选．吉林农业科学 1998，(4)：39-38
20．秘彩莉，沈银柱，黄占景，等．小麦耐盐突变体的分子生物学鉴定．遗传，1999，21(6)：32-36
21．邱明光，杨雪彦，周志华，等．毛白杨愈伤组织培养成苗的研究．西北林学院学报，1991，6(4)：29-33
22．沈效东，张新宁，袁世杰，等．生长调节剂对毛白杨叶愈伤组织诱导和植株再生的影响．宁夏农林科技，1996，(6)：18-20
23．沈银柱，刘植义，何聪芬．诱发小麦花药愈伤组织及其再生植株抗盐性变异的研究．遗传，1997，19(6)：7-12
24．沈银柱，刘植义，张召铎，等．诱发小麦成熟胚愈伤组织及其再生植株抗盐性变异的研究．遗传学报，1993，20(3)：283-291
25．索广力，沈银柱，黄占景，等．小麦耐盐突变体的RAPD分析．西北植物学报，1999，19(3)：370-380
26．陶晶，秦彩云，姚露贤，等．杨树耐盐性突变体育种的研究进展．吉林林业科技，2000，20(2)：5-8
27．田少华，梁竹青，高明尉，等．诱变与组织培养相结合诱发水稻耐盐突变的初步研究．核农学报，1988，2(2)：65-72
28．王长泉，刘峰，李雅志．果树诱变育种的研究进展．核农学报，2000，14(1)：61-64
29．王长泉，宋恒．杜鹃抗盐突变体的筛选．核农学报，2003，17(3)：179-183
30．王翠亭，黄占景，何聪芬，等．PCR-SSCP与测序技术相结合检测小麦耐盐突变体．遗传学报，2001，28(9)：852-855
31．王翠亭，黄占景，何聪芬，等．小麦耐盐突变体生化标记的研究．麦类作物学报，2002，22(1)：10-13
32．王存喜，程炳嵩，李雅志，等．中华猕猴桃耐盐变异体筛选．核农学报，1990，4(4)：202-212
33．王海英，孙建设，王旭静，等．果树耐盐性研究进展．河北农业大学学报，2000，23(2)：54-58
34．王仑山，陆卫，孙彤，等．枸杞耐盐变异体的筛选及植株再生．遗传，1995，17(6)：7-11
35．王仑山，王鸣刚，王亚馥．利用组织和细胞培养筛选作物耐盐突变体的研究．植物学通报，1996，13(2)：7-12
36．王鸣刚，王毓美，牛炳韬，等．小麦耐盐系筛选及稳定性研究．兰州大学学报(自然科学版)，1999，(1)：149-153
37．王小军，鲍文奎．八倍体小黑麦耐盐细胞系产生的遗传机制．植物遗传学报，1998，40(4)：330-336
38．王兴军，姚敦义．运用多步选择系统筛选木槿耐盐突变体．植物生理学通讯，1994，30(1)：22-24
39．王瑛，贾敬芬．沙打旺耐盐细胞系的筛选及特性分析．应用与环境生物学报，1999，5(6)：547-550
40．王振英，郑坚瑜，陈瑞阳．盐胁迫、辐射条件下耐盐与不耐盐水稻POD同工酶、全蛋白变化的研究．南开大学学报(自然科学)，1999，32(1)：23-27
41．韦小敏，季良越，故颜民，等．玉米耐盐愈伤组织变异体的筛选初报．河南农业大学学报，2000，34(4)：324-328
42．奚元龄，颜昌敬．植物细胞培养手册．北京：农业出版社，1992
43．徐冠仁．植物诱变育种学．北京：中国农业出版社，1996
44．徐云远，王鸣刚，贾敬芬．红豆草耐盐愈伤组织的筛选及植株再生．西北植物学报，2000，20(1)：15-21
45．许祥明，叶和春，李国凤，等．芦苇耐盐变异体与野生型植株某些特性的比较．植物学报，2000，42(11)：1126-1130
46．杨青川，卞桂虹，刘德福，等．植物耐盐遗传性及分子标记研究进展．中国草地，2002，24(2)：59-62
47．岳玮，夏光敏，陈惠民，等．獐毛愈伤组织耐盐性研究及耐盐变异体的筛选．山东大学学报(自然科学版)，2000，35(3)：338-343
48．詹亚光，刘玉喜，陆志华，等．杨树花药培养筛选耐盐变异体的研究．Bulletin of Botannical Research，1994，14(1)：98-103
49．张成合，曹军，鲍文奎，等．小黑麦单倍体愈伤组织(n=28)耐碱和耐盐变异体的研究．植物学报，1986，28(2)：137-144
50．张耕耘，郭岩，刘凤华，等．九个水稻耐盐突变体的RFLP分析．植物学报，1994，36(5)：345-350
51．张慧，周骏马，郭岩，等．水稻突变体M-20的耐盐生理特性．植物生理学报，1997，(2)：181-186
52．张举仁，高树芳，于家驹，等．玉米耐盐愈伤组织的筛选及植株再生．植物学报，1991，33(1)：887-89
53．张可炜，王先艳，王灵芝，等．利用细胞工程技术培育玉米耐盐自交系及单交种．山东农业科学，2001，(6)：15-17
54．张绮纹，张望东．群众杨39无性系耐盐悬浮细胞系的建立和体细胞耐盐变异体完整植株诱导．林业研究，1995，8(4)：395-401
55．张亚兰，李彦舫，杨柏明，等．短芒大麦耐盐变异体的筛选与鉴定．Prataculture Science，1998，15(1)：30-32
56．赵茂林．组培方法筛选杨树耐盐碱性变异体的研究．山西林业科技，1989，(4)：19-22
57．赵瑞堂，高书国，乔亚科，等．花药培养在小麦耐盐突变体育种上的应用研究．作物学报，1995，21(2)：230-234
58．赵素然，梁宇，李德森，等．毛白杨愈伤组织悬浮细胞耐盐性研究．广西植物，2000，20(4)：351-355．
59．周容仁，杨燮荣，余叔文．利用组织培养选择烟草耐盐愈伤组织变异体并分化出再生植株．实验生物学报，1986，19(3)：279-287
60．周容仁，杨燮荣，余叔文．利用组织培养研究植物耐盐机理与筛选耐盐突变体的进展．植物生理学通讯，1989，(5)：11-19
61. Chaleffa R S. Isolation of agronomically useful mutants from plant cell culture. Science, 1983,219:676-682
62. Melchers G. Haploid higher plants for plant breeding. Z.Pflanzensuchtg, 1972, 67:19-32
63. Nabors M W, Gibbs S E, Bernstein C S. NaCl-tolerant tobacco plants from cultured cell. Z.Pflanzenphysiol,1980, (97) 13-17
64. Oono K. in: Thpe A(AD) Plant Tissue Method and Application in Agriculture. Academic Press, 1981,pp.273
65. Pilar C A, Eduardo P M. Selection of NaCl-tolerant Citrus. Plant Cell Reports,1995,14(5):314-318
66. Zenk M H. Haploids in physiological and biochemical research. In Haploids In higher plants advances potential. Ed. by Kasha, K.J, Guelph Univ. Guelph, 1974, pp. 339-35
2．陈可咏，叶和春，陈建林，等．芦苇耐盐变异植株及其细胞学鉴定．植物学报，1994，36(12)：930-933
3．陈受宜，朱立煌，洪建，等．水稻耐盐突变体分子生物学鉴定．植物学报，1991，33(8)：569-573
4．戴伟民，赵艳，蔡润，等．番茄耐盐愈伤组织的筛选及显微结构观察．上海交通大学学报(农业科学版)，2001，19(2)：112-116
5．杜立群，李银心，李宏杰，等．在1/3海水培养基上筛选豆瓣菜耐盐突变体．植物学报，1999，41(6)：633-639
6．冯桂苓，谢兆印，杨文珍，等．水稻成熟胚愈伤组织耐盐变异体的筛选．天津农业科学，1996，(3)：6-8
7．谷祝平，郑国昌．快中子辐射诱变和盐培养基选择红豆草耐盐耐盐愈伤组织变异系的研究．生物工程学报，1991，7(1)：72-76
8．郭朝辰．杨树抗盐性及其在盐渍土上的生理过程．陕西林业科技，1990，21(3)：14-16
9．郭房庆，李群，顾瑞琦．抗盐小麦突变体的诱变筛选及其抗盐性的比较．核农学报，1997，11(1)：1-8
10．郭岩，陈少麟，张耕耘，等．应用细胞工程获得受主效应基因控制的水稻耐盐突变系．遗传学报，1997，24(2)：122-126
11．韩锦峰．植物生理生化．北京：高等教育出版社，1990
12．李爱贤，刘庆昌，王玉萍，等．甘薯耐旱、耐盐突变体的离体筛选．农业生物技术学报，2002，10(1)：15-19
13．李春兰，侯全民，曾令和，等．辐射诱变与组织培养相结合诱导小麦耐盐细胞系初探．核农学通报，1990，11(1)：8-12
14．李驹，陈维明．杨树耐盐细胞系的筛选及不定苗再生的研究．林业科技通讯，1984，(1)：1-3．
15．李玲，韩一凡．杨树耐盐变异体的筛选．林业科学，1990，26(4)：359-362
16．李周岐，邱明光，杨秀平．河北杨体细胞抗盐性变异系氨基酸组分变异性分析．陕西林业科技，1995，(3)：7-10
17．李周岐．高等植物体细胞突变体离体筛选技术及其在林木抗盐育种上的应用．陕西林业科技，1994，(4)：50-55
18．刘功弼．柑桔精简组织培养及其人工诱变初报．园艺学报，1983，10(4)：277-280
19．刘艳芝，庄炳昌，赵桂兰，等．大豆子叶节组培耐盐突变体筛选．吉林农业科学 1998，(4)：39-38
20．秘彩莉，沈银柱，黄占景，等．小麦耐盐突变体的分子生物学鉴定．遗传，1999，21(6)：32-36
21．邱明光，杨雪彦，周志华，等．毛白杨愈伤组织培养成苗的研究．西北林学院学报，1991，6(4)：29-33
22．沈效东，张新宁，袁世杰，等．生长调节剂对毛白杨叶愈伤组织诱导和植株再生的影响．宁夏农林科技，1996，(6)：18-20
23．沈银柱，刘植义，何聪芬．诱发小麦花药愈伤组织及其再生植株抗盐性变异的研究．遗传，1997，19(6)：7-12
24．沈银柱，刘植义，张召铎，等．诱发小麦成熟胚愈伤组织及其再生植株抗盐性变异的研究．遗传学报，1993，20(3)：283-291
25．索广力，沈银柱，黄占景，等．小麦耐盐突变体的RAPD分析．西北植物学报，1999，19(3)：370-380
26．陶晶，秦彩云，姚露贤，等．杨树耐盐性突变体育种的研究进展．吉林林业科技，2000，20(2)：5-8
27．田少华，梁竹青，高明尉，等．诱变与组织培养相结合诱发水稻耐盐突变的初步研究．核农学报，1988，2(2)：65-72
28．王长泉，刘峰，李雅志．果树诱变育种的研究进展．核农学报，2000，14(1)：61-64
29．王长泉，宋恒．杜鹃抗盐突变体的筛选．核农学报，2003，17(3)：179-183
30．王翠亭，黄占景，何聪芬，等．PCR-SSCP与测序技术相结合检测小麦耐盐突变体．遗传学报，2001，28(9)：852-855
31．王翠亭，黄占景，何聪芬，等．小麦耐盐突变体生化标记的研究．麦类作物学报，2002，22(1)：10-13
32．王存喜，程炳嵩，李雅志，等．中华猕猴桃耐盐变异体筛选．核农学报，1990，4(4)：202-212
33．王海英，孙建设，王旭静，等．果树耐盐性研究进展．河北农业大学学报，2000，23(2)：54-58
34．王仑山，陆卫，孙彤，等．枸杞耐盐变异体的筛选及植株再生．遗传，1995，17(6)：7-11
35．王仑山，王鸣刚，王亚馥．利用组织和细胞培养筛选作物耐盐突变体的研究．植物学通报，1996，13(2)：7-12
36．王鸣刚，王毓美，牛炳韬，等．小麦耐盐系筛选及稳定性研究．兰州大学学报(自然科学版)，1999，(1)：149-153
37．王小军，鲍文奎．八倍体小黑麦耐盐细胞系产生的遗传机制．植物遗传学报，1998，40(4)：330-336
38．王兴军，姚敦义．运用多步选择系统筛选木槿耐盐突变体．植物生理学通讯，1994，30(1)：22-24
39．王瑛，贾敬芬．沙打旺耐盐细胞系的筛选及特性分析．应用与环境生物学报，1999，5(6)：547-550
40．王振英，郑坚瑜，陈瑞阳．盐胁迫、辐射条件下耐盐与不耐盐水稻POD同工酶、全蛋白变化的研究．南开大学学报(自然科学)，1999，32(1)：23-27
41．韦小敏，季良越，故颜民，等．玉米耐盐愈伤组织变异体的筛选初报．河南农业大学学报，2000，34(4)：324-328
42．奚元龄，颜昌敬．植物细胞培养手册．北京：农业出版社，1992
43．徐冠仁．植物诱变育种学．北京：中国农业出版社，1996
44．徐云远，王鸣刚，贾敬芬．红豆草耐盐愈伤组织的筛选及植株再生．西北植物学报，2000，20(1)：15-21
45．许祥明，叶和春，李国凤，等．芦苇耐盐变异体与野生型植株某些特性的比较．植物学报，2000，42(11)：1126-1130
46．杨青川，卞桂虹，刘德福，等．植物耐盐遗传性及分子标记研究进展．中国草地，2002，24(2)：59-62
47．岳玮，夏光敏，陈惠民，等．獐毛愈伤组织耐盐性研究及耐盐变异体的筛选．山东大学学报(自然科学版)，2000，35(3)：338-343
48．詹亚光，刘玉喜，陆志华，等．杨树花药培养筛选耐盐变异体的研究．Bulletin of Botannical Research，1994，14(1)：98-103
49．张成合，曹军，鲍文奎，等．小黑麦单倍体愈伤组织(n=28)耐碱和耐盐变异体的研究．植物学报，1986，28(2)：137-144
50．张耕耘，郭岩，刘凤华，等．九个水稻耐盐突变体的RFLP分析．植物学报，1994，36(5)：345-350
51．张慧，周骏马，郭岩，等．水稻突变体M-20的耐盐生理特性．植物生理学报，1997，(2)：181-186
52．张举仁，高树芳，于家驹，等．玉米耐盐愈伤组织的筛选及植株再生．植物学报，1991，33(1)：887-89
53．张可炜，王先艳，王灵芝，等．利用细胞工程技术培育玉米耐盐自交系及单交种．山东农业科学，2001，(6)：15-17
54．张绮纹，张望东．群众杨39无性系耐盐悬浮细胞系的建立和体细胞耐盐变异体完整植株诱导．林业研究，1995，8(4)：395-401
55．张亚兰，李彦舫，杨柏明，等．短芒大麦耐盐变异体的筛选与鉴定．Prataculture Science，1998，15(1)：30-32
56．赵茂林．组培方法筛选杨树耐盐碱性变异体的研究．山西林业科技，1989，(4)：19-22
57．赵瑞堂，高书国，乔亚科，等．花药培养在小麦耐盐突变体育种上的应用研究．作物学报，1995，21(2)：230-234
58．赵素然，梁宇，李德森，等．毛白杨愈伤组织悬浮细胞耐盐性研究．广西植物，2000，20(4)：351-355．
59．周容仁，杨燮荣，余叔文．利用组织培养选择烟草耐盐愈伤组织变异体并分化出再生植株．实验生物学报，1986，19(3)：279-287
60．周容仁，杨燮荣，余叔文．利用组织培养研究植物耐盐机理与筛选耐盐突变体的进展．植物生理学通讯，1989，(5)：11-19
61. Chaleffa R S. Isolation of agronomically useful mutants from plant cell culture. Science, 1983,219:676-682
62. Melchers G. Haploid higher plants for plant breeding. Z.Pflanzensuchtg, 1972, 67:19-32
63. Nabors M W, Gibbs S E, Bernstein C S. NaCl-tolerant tobacco plants from cultured cell. Z.Pflanzenphysiol,1980, (97) 13-17
64. Oono K. in: Thpe A(AD) Plant Tissue Method and Application in Agriculture. Academic Press, 1981,pp.273
65. Pilar C A, Eduardo P M. Selection of NaCl-tolerant Citrus. Plant Cell Reports,1995,14(5):314-318
66. Zenk M H. Haploids in physiological and biochemical research. In Haploids In higher plants advances potential. Ed. by Kasha, K.J, Guelph Univ. Guelph, 1974, pp. 339-35