大兴安岭地区杜香有效成分的研究
|
摘要
杜香是黑龙江省蓄积量丰富的野生植物资源，国内外的研究资料都表明其具有重要的香料价值和药用价值，本文以生长于大兴安岭地区的杜香为研究对象，建立了高效液相色谱法分析杜香有效成分—香豆素和熊果酸的色谱条件，确定了超临界二氧化碳萃取法提取香豆素和精油最佳条件，确定了超声波提取熊果酸的最佳条件，并用硅胶柱分离法对其进行了分离纯化。研究结果如下：
1．高效液相色谱法分析香豆素含量的色谱条件：ODS柱(25cm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水(体积比40：60)；检测波长：273nm；进样量：10μL；流速：1.0mL／min；柱温：25℃。高效液相色谱法分析熊果酸含量的色谱条件：流动相：甲醇：水(体积比90：10)；检测波长：210nm；其余条件同上。
2．超临界CO_2萃取法提取香豆素的最佳条件：萃取温度45℃，萃取压力30Mpa，分离温度55℃，其中萃取压力是影响提取率的主要因素。超临界CO_2萃取法的提取率是14.13μg／g，是用乙醇浸提法提取得率(4.26μg／g)的3.32倍。
3．超临界CO_2萃取法提取杜香精油的条件是：萃取温度55℃，萃取压力25Mpa，第一分离釜压力8Mpa，分离釜温度35℃。其中分离釜压力是主要影响因素。采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)，通过标准谱图库检索对萃取物的组分进行分析鉴定，超临界萃取物含有蜡质和脂肪酸等非挥发性杂质。
4．大兴安岭地区杜香不同采集期精油和熊果酸的含量均不同，二者的最高含量均出现在果实成熟的8月份，在生产中其采集期可适当放宽。
5．熊果酸的最佳提取方法是超声提取法，超声提取条件为乙醇浓度95％，超声温度45℃，时间30min，频率40KHz，其中乙醇浓度是主要影响因素。
6．用硅胶柱层析的方法对提取物进行初步分离，洗脱液为氯仿：甲醇(体积比500：1)，显色剂为5％的硫酸乙醇溶液，蒸发回收溶剂后得到的浸膏，用95％的乙醇重结晶一次得到纯度为85％的熊果酸粗品。
进一步考察杜香中的有效成分，建立综合利用工艺，提高综合利用率，对于满足当前国际社会对天然药物的需求，充分利用我国丰富的植物资源具有极其重要的意义。
Ledum palustre L. is a kind of wild source plant that spreads widely in forestry areas of Heilongjiang province. Its flavor value and medical usefulness value have been paid much attention recently by many researchers. A high performance liquid chromatography (HPLC) method was developed for the determination of ursolic acid and coumarin in Ledum palustre L. Coumarin and essential oil had been extracted by SFE-CO2 methods and the best parameters had been determined. Ursolic acid had been extracted by the ultrasonic method and the best parameters determined. Ursolic acid has been isolated primarily through silica gel column chromatography. The results are as follows:
1 .The chromatographic analysis of coumarin was carried out using a Techsphere ODS C18 column(25cmx4.6mm, 5μm); The mobile phase was acetonitrile-water(40:60, v/v); the flow rate was maintained at 1.0mL/min; the wavelength at 273nm; The column temperature was 25℃. The chromatographic analysis of ursolic acid was carried out. The mobile phase was methanol-water(90:10, v/v), the wavelength at 210nm, other conditions were the same as above mentioned.
2.The best parameters of extracting coumarin by SFE-CO2 methods were: extraction temperature as 45℃, extraction pressure as 30Mpa, isolation temperature as 55℃, extraction pressure was the main factor of them. The yield was 14.13μg/g by SFE-CO2 methods 3.32 times of ethanol dipping method (4.26μg/g).
3.The best parameters of extracting essential oil by SFE-CO2 methods were: extraction temperature as 55℃, extraction pressure as 25Mpa, isolation temperature as 35℃, isolation pressure was the main factor of them. The extraction product had been identified to contain the non-volatilisation component- waxiness and fatty acid by the method of GC-MS, further to analyze through chromatographic figure bank.
4.The content of essential oil and ursolic acid was not same in different collection period of the species. Their content was the highest in August when fruit was mature. The collection period can widen during the yield.
5.The best method to extract ursolic acid is ultrasonic method, the parameter: ethanol concentration as 95%, the temperature as 45℃, time as 30min, the frequency as
40KHz, ethanol concentration is the main factor of them.
6. Ursolic acid has been isolated and purified primarily in Ledum palustre L. through silica gel column chromatography with 500:1 MeOH-CHCl3 and recrystallized to obtain 85% ursolic acid.
It's very important to study the effective components further in Ledum palustre L., establish integrate craftwork, enhance the integrate rate of application for satisfying the need of international societies and utilizing plant resource abundantly in our country.
1．高效液相色谱法分析香豆素含量的色谱条件：ODS柱(25cm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水(体积比40：60)；检测波长：273nm；进样量：10μL；流速：1.0mL／min；柱温：25℃。高效液相色谱法分析熊果酸含量的色谱条件：流动相：甲醇：水(体积比90：10)；检测波长：210nm；其余条件同上。
2．超临界CO_2萃取法提取香豆素的最佳条件：萃取温度45℃，萃取压力30Mpa，分离温度55℃，其中萃取压力是影响提取率的主要因素。超临界CO_2萃取法的提取率是14.13μg／g，是用乙醇浸提法提取得率(4.26μg／g)的3.32倍。
3．超临界CO_2萃取法提取杜香精油的条件是：萃取温度55℃，萃取压力25Mpa，第一分离釜压力8Mpa，分离釜温度35℃。其中分离釜压力是主要影响因素。采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)，通过标准谱图库检索对萃取物的组分进行分析鉴定，超临界萃取物含有蜡质和脂肪酸等非挥发性杂质。
4．大兴安岭地区杜香不同采集期精油和熊果酸的含量均不同，二者的最高含量均出现在果实成熟的8月份，在生产中其采集期可适当放宽。
5．熊果酸的最佳提取方法是超声提取法，超声提取条件为乙醇浓度95％，超声温度45℃，时间30min，频率40KHz，其中乙醇浓度是主要影响因素。
6．用硅胶柱层析的方法对提取物进行初步分离，洗脱液为氯仿：甲醇(体积比500：1)，显色剂为5％的硫酸乙醇溶液，蒸发回收溶剂后得到的浸膏，用95％的乙醇重结晶一次得到纯度为85％的熊果酸粗品。
进一步考察杜香中的有效成分，建立综合利用工艺，提高综合利用率，对于满足当前国际社会对天然药物的需求，充分利用我国丰富的植物资源具有极其重要的意义。
Ledum palustre L. is a kind of wild source plant that spreads widely in forestry areas of Heilongjiang province. Its flavor value and medical usefulness value have been paid much attention recently by many researchers. A high performance liquid chromatography (HPLC) method was developed for the determination of ursolic acid and coumarin in Ledum palustre L. Coumarin and essential oil had been extracted by SFE-CO2 methods and the best parameters had been determined. Ursolic acid had been extracted by the ultrasonic method and the best parameters determined. Ursolic acid has been isolated primarily through silica gel column chromatography. The results are as follows:
1 .The chromatographic analysis of coumarin was carried out using a Techsphere ODS C18 column(25cmx4.6mm, 5μm); The mobile phase was acetonitrile-water(40:60, v/v); the flow rate was maintained at 1.0mL/min; the wavelength at 273nm; The column temperature was 25℃. The chromatographic analysis of ursolic acid was carried out. The mobile phase was methanol-water(90:10, v/v), the wavelength at 210nm, other conditions were the same as above mentioned.
2.The best parameters of extracting coumarin by SFE-CO2 methods were: extraction temperature as 45℃, extraction pressure as 30Mpa, isolation temperature as 55℃, extraction pressure was the main factor of them. The yield was 14.13μg/g by SFE-CO2 methods 3.32 times of ethanol dipping method (4.26μg/g).
3.The best parameters of extracting essential oil by SFE-CO2 methods were: extraction temperature as 55℃, extraction pressure as 25Mpa, isolation temperature as 35℃, isolation pressure was the main factor of them. The extraction product had been identified to contain the non-volatilisation component- waxiness and fatty acid by the method of GC-MS, further to analyze through chromatographic figure bank.
4.The content of essential oil and ursolic acid was not same in different collection period of the species. Their content was the highest in August when fruit was mature. The collection period can widen during the yield.
5.The best method to extract ursolic acid is ultrasonic method, the parameter: ethanol concentration as 95%, the temperature as 45℃, time as 30min, the frequency as
40KHz, ethanol concentration is the main factor of them.
6. Ursolic acid has been isolated and purified primarily in Ledum palustre L. through silica gel column chromatography with 500:1 MeOH-CHCl3 and recrystallized to obtain 85% ursolic acid.
It's very important to study the effective components further in Ledum palustre L., establish integrate craftwork, enhance the integrate rate of application for satisfying the need of international societies and utilizing plant resource abundantly in our country.
引文
1 蔡建国．天然香料植物的超临界CO_2萃取及应用问题．香精香料化妆品，2000；2：32-36
2 才谦，杨松松，马学敏，孟宪生，曹爱民，刘玉强．超临界从独活中萃取香豆素类成分的工艺研究．辽宁中医杂志，2001；28(9)：953-955
3 陈新，崔健，张英华．超临界流体萃取法在提取天然植物中有效成分的应用．长春中医学院学报，1997；13(63)：55
4 杜香协作组．宽叶杜香挥发油的初步研究．中草药通讯，1975；2：11-15
5 冯若，赵逸云，李化茂等．超声在生物技术中应用的研究进展．生物化学与生物物理进展，1994；21(6)：500-503
6 冯旭，周勇，郭立新．黑龙江省野生香料植物资源及其利用．国土与自然资源研究，1995；2：68-72
7 高海，孙文基．毛细管气相色谱法测定蛇床子中蛇床子素和欧前胡素的含量．药物分析杂志，1991；11(6)：360
8 郭富礼，张振凌，王洪波．不同山茱萸炮制品中熊果酸含量的比较．时珍国医国药，2002；13(7)：404-405
9 郭力．熊果酸有望成为抗癌新药．中国肿瘤，1998；7(7)：29
10 郭萍．香豆素和香豆素类的合成方法及研究进展．辽宁化工，1998；27(2)：76-78
11 郭孝武．超声提取黄芪苷成分的实验研究．中国现代应用药学杂志，1999；16(3)：18-20
12 郭孝武．一种提取中草药化学成分的方法—超声提取法．天然产物研究与开发，1993；11(3)：83-84
13 郭孝武，杨锐．不同频率超声提取对益母草总碱提出率的影响．中国医院药学杂志，1999；19(8)：564-565
14 国家医药管理局中草药情报站，植物药有效成分手册．第一版．北京：人民卫生出版社，1986：185
15 黄昌全，雷正杰．苍术超临界CO_2萃取物化学成分分析．中药材，2001，24(10)：726-727
16 黄镜，孙燕．熊果酸的抗肿瘤活性．中国新药杂质，1997；6(2)：101-104
17 黄小键．HPLC法测定白花蛇舌草中熊果酸的含量．中草药，1996；7：408
18 黄致喜，王慧辰．萜类香料化学．中国轻工业出版社，1999年
19 景治中，王美兰，陈涑年．细叶杜香精油的色谱-质谱联用分析．色谱，1993；11(4)：244-245
20 金晓玲，杜红岩，杜兰英，李福海．超临界CO_2萃取技术研究现状及发展趋势．经济林研
究，2002：20(4)：71-74
21 李靖．杜香精油提炼技术．中国林副特产，1989；9：36-38
22 李菁，葛发欢，黄萧芬等．超临界CO_2萃取当归挥发油的研究，中药材，1996，19(4)：187-189
23 林翠英，周晶，赵晶等．芦丁超声提取新技术的再探索．中草药，1999；30(5)：350-351
24 林克勤．黑龙江省植物精油化学成分及其利用的研究．自然资源研究，1984；2：38-44
25 林克勤，宿伯杰．杜香精油利用与生产工艺研究．自然资源研究，1986；2：34-42
26 林克勤译．杜香生物活性物质．国土与自然资源研究，1995；1：73-76
27 李淑芬，陈宝良，韩金玉．超临界CO_2萃取天然产品的特性研究．化工进展，1997；2：10-14
28 李天祥，王静康．超临界CO_2流体萃取技术在天然物提取上的研究进展．天津大学学报，2002；35(4)：417-423
29 刘金荣，江发寿，但建明，王航宇，赵文斌．独尾草多糖的超声提取及含量测定．中草药，2002；33(4)：322-323
30 李晓蒙，廖华卫．夏枯草中熊果酸的含量测定．广东药学院学报，2002；18(1)：31-32
31 李志勇，郭勇，罗焕亮．香豆素类化合物——抗HIV天然药物．生命的化学，1999；19(4)：197-198
32 吕琳，朱宇明，钱用强，司云珊，张瑾．强肝消脂胶囊中熊果酸的含量测定．长春中医学院学报，1999；15(4)：56
33 骆望美，宓鹤鸣，黄河舟．超临界流体萃取技术在现代中药研究中的应用．．解放军药学学报，2001；18(6)：351-353
34 潘太安，彭励．超临界CO_2萃取葡萄籽油的研究．食品工业科技．2001，22(4)：22-24
35 彭洪，张镜澄，郭振德．超临界CO_2萃取技术在生理活性物质萃取上的应用．中国医药工业杂质，1995；26(11)：519-523
36 邱志国，尹成增，郭雪飞等．杜香油主要成分的分离和鉴定．东北林业大学学报，1997；25(11)：41-44
37 曲涛，宋立新，张微．细叶杜香空气杀菌实验．中医药信息，1996；6：37
38 沈红梅，程涛，乔传卓等．乌梅的体外抗肿瘤活性及免疫调节作用初探．中国中药杂志，1995；20(6)：365
39 孙爱东，葛毅强等．CO_2超临界流体萃取技术提取甜橙皮精油的研究．食品工业科技，1999；20(3)：7-8
40 孙爱东．CO_2超临界萃取技术提取麦胚芽油的研究．食品工业科技，1997，5：68-70
41 山原条二．药学杂志(日)1981，101(1)：86
42 史庆龙，林秀仙．超临界CO_2萃取技术在云南红豆杉化学成分研究中的应用．中药材，2001，24(5)：338-339
43 孙来九，王文丰，郭人民，赵立新．以枸骨叶为原料提取熊果酸的工艺研究．现代化工，2000；20(9)：47-48
44 孙燕，袁瑞荣，吴居等．齐墩果酸的促免疫作用．中国临床药理学杂志，1988；4(1)：26
45 隋晓，丛培江．超临界萃取技术在中草约提取中的应用进展．青岛大学学报，2001；16(2)：72-74
46 唐传核，彭志英．天然功能性植物化学成分开发现状．粮食与油脂，2001；3：38-40
47 王炎，赵敏．大兴安岭地区细叶杜香挥发性成分的研究．色谱，2003；21(6)：631-632
48 吴芳，刘新宇，陈连剑，郭华，范国荣．蛇床子总香豆素的测定及其提取条件的正交设计优选．中药新药与临床药理，2002；13(2)：113-117
49 辛柏福，于长华，么希平．黑龙江杜香精油的开发利用．黑龙江大学自然科学学报，1996；13(2)：114-116
50 徐德然，丁晴，王峥涛．HPLC法测定山茱萸及知柏地黄丸中齐墩果酸、熊果酸的含量．中草药，2002；33(11)：996-997
51 徐志远．长白山植物药志．吉林人民出版社，长春第863页
52 赵德修，王华亭，吴承顺等．狭叶杜香挥发油成分的初步研究．植物学报，1987；29(2)：189-192
53 杨海燕，王群，金伟．超临界CO_2流体萃取缬草精油的研究．新疆农业大学学报 1998；2(1)：43-46
54 杨劲松，哈永年，刘艳华．大兴安岭地区不同生长期和海拔高度越桔叶中熊果酸的含量测定．中国兽药杂志，1995；29(4)：37-39
55 杨涛，李静海．超临界流体萃取天然药物的研究现状及发展趋势．化工冶金，1997；18(4)：377-383
56 杨晓彤，程乐乐，糜可，周韵丽，杨庆尧．山楂核中熊果酸含量的HPLC测定．上海中医药大学学报，2001；15(3)：53-55
57 姚新生．天然药物化学．人民卫生出版社，2001；248-249
58 应崇福主编．超声学[M]．北京：科学出版社，1990：511
59 原春兰，李宗孝，杨佩云．地榆中熊果酸的提取．中国医药工业杂志，2002；33(10)：478-479
60 袁珂，董留民．HPLC法测定冬凌草中熊果酸、齐墩果酸的含量．中国实验方剂学杂志，
1998；4(6)：1-2
61 张晨，刘志伟．超临界CO_2萃取沙田柚皮精油的研究．农牧产品开发，2000；3：12-13
62 张镜澄．超临界流体萃取．化学工业出版社，2000年
63 张启兴，沈德凤，杨波，李艳翠．车前草中熊果酸的含量测定．中国野生植物资源，2001；20(4)：42-43
64 张新勇，向仁德．蛇床子化学成分的研究．中草药，1997；28(10)：588
65 赵世萍，陈玉武，付桂香．高压液相色谱法测定夏枯草中熊果酸的含量．中日友好医院学报，1996；10(3)：201-204
66 赵振东，王亚玲，杜晓光等．杜香精油主要组成及利用的研究．林产化工通讯，2001；35(5)：3-6
67 周俊，贺小江．加强我国植物化学研究．中国科学院院刊，2000；6：413-416
68 周以良等．黑龙江树木志．哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1984；460-461
69 周以良主编．中国大兴安岭植被．第一版．哈尔滨：科学出版社，1991；239
70 周以良主编．中国小兴安岭植被．第一版．哈尔滨：科学出版社，1994；310
71 朱铉，全香花，崔哲等．杜香萜烯对安定透皮吸收作用影响的研究．延边大学医学学报，1998；21(11)：29-31
72 佐建锋，郭增军，李教社．香豆素类化合物的药理研究进展．中药材，2003；26(9)：686-689
73 美国植物化学品产值快速增长．精细化工，2001；6(18)：368
74 Ames BN. Dietary carcinogens and ant carcinogens. Science, 1983,221:1256
75 Balanehru S, Nagarajan B. Protective effect of oleanolic acid and ursolic acid against ilpidper oxidation [J]. Biochen Int, 1991,24 (5): 981
76 Bol shakova IV, Lozovskaia EL, Sapezhinski Ⅱ Antioxidant properties of plant extracts. Biofizika, 1998, Mar-Apr 43: 186-188
77 Demagglo A E, Phar Sc Ovadia M E, et al. Pharm Sci, 1965; 54(7): 10-13
78 Huang MT, Ho CT, Wang ZY, et al. Inhibition of skin tumor genesis by rose mary and its constituents carnosol and ursolic acid [J]. Cancer Res,1994,54 (3): 701
79 Lee KH, Lin YM, Wu TS, et al. The cytotoxic principles of Prunella vulgaris, Psychotic ria serpens, and Hyptis capitata:ursolic acid and related derivatives [J].Planta Med,1988,54 (4): 308
80 Muto Y, Ninomiya M, Fujiki H. Present status of research on cancer chemoprevention in Japan [J]. Jpn J Clin Oncol, 1990,20 (3): 219
81 Narimanov AA. The ant radiation effectiveness of a mixture of Archangelica officinalis and Ledum palustre extracts in the fractionated gamma irradiation of mice [J],Radiobiological, 1993, Mar-Apr 33: 280
82 Narimanov AA. The reproductive capacity of male mice protected against the super lethal action of gamma radiation by the administration of a mixture of Archangelica officinalis and Ledum palustre extracts [J],Radeobiologiia, 1992, Mar-Apr 32:271-275
83 Narimanov AA,Miakisheva SN, Kuznetsova SM. The radio protective effect of extrccts of Archangelica officinalis and Ledum palustre L. on mice, Radeobiologiia [J], 1991, May-Jun 31:391-393
84 Niikawa M, Hayashi H, Sato T, et al. Isolation of substances from glossy privet(Ligature lucidum Ait)inhibiting the mutagenicity of benzo(α)pyrene in bacteria. Mutat Res,1993; 319 (1): 1
85 Simon A, Najid A, Chulia AJ, et al. Inhibition of lipoxygenase activity and HL60 leukemia cell proliferation by ursolic acid isolated from heather flowers (Callluna vulgaris)[J].Biochem Biophys Acta, 1992, 1125 (1): 68
86 Sohn KH, Lee HY, Chung HY, et al. Anti-angiogenic activity of triterpene acids [J]. Cancer Lett, 1995, Aug 1: 213
87 Young HS, Chung HY, Lee CK, et al. Ursolic acid inhibits aflatoxin Bl-induced mutagenicity in a Salmonella assay system [J]. Biol Pharm Bull, 1994,17 (7): 990i, 1964; 53 (8): 945-946
88 Ledum palustre 1..13 Ⅷ 1996: 74-82
89 paeoniaceae-Thymelaeaceae 1985; 336
2 才谦，杨松松，马学敏，孟宪生，曹爱民，刘玉强．超临界从独活中萃取香豆素类成分的工艺研究．辽宁中医杂志，2001；28(9)：953-955
3 陈新，崔健，张英华．超临界流体萃取法在提取天然植物中有效成分的应用．长春中医学院学报，1997；13(63)：55
4 杜香协作组．宽叶杜香挥发油的初步研究．中草药通讯，1975；2：11-15
5 冯若，赵逸云，李化茂等．超声在生物技术中应用的研究进展．生物化学与生物物理进展，1994；21(6)：500-503
6 冯旭，周勇，郭立新．黑龙江省野生香料植物资源及其利用．国土与自然资源研究，1995；2：68-72
7 高海，孙文基．毛细管气相色谱法测定蛇床子中蛇床子素和欧前胡素的含量．药物分析杂志，1991；11(6)：360
8 郭富礼，张振凌，王洪波．不同山茱萸炮制品中熊果酸含量的比较．时珍国医国药，2002；13(7)：404-405
9 郭力．熊果酸有望成为抗癌新药．中国肿瘤，1998；7(7)：29
10 郭萍．香豆素和香豆素类的合成方法及研究进展．辽宁化工，1998；27(2)：76-78
11 郭孝武．超声提取黄芪苷成分的实验研究．中国现代应用药学杂志，1999；16(3)：18-20
12 郭孝武．一种提取中草药化学成分的方法—超声提取法．天然产物研究与开发，1993；11(3)：83-84
13 郭孝武，杨锐．不同频率超声提取对益母草总碱提出率的影响．中国医院药学杂志，1999；19(8)：564-565
14 国家医药管理局中草药情报站，植物药有效成分手册．第一版．北京：人民卫生出版社，1986：185
15 黄昌全，雷正杰．苍术超临界CO_2萃取物化学成分分析．中药材，2001，24(10)：726-727
16 黄镜，孙燕．熊果酸的抗肿瘤活性．中国新药杂质，1997；6(2)：101-104
17 黄小键．HPLC法测定白花蛇舌草中熊果酸的含量．中草药，1996；7：408
18 黄致喜，王慧辰．萜类香料化学．中国轻工业出版社，1999年
19 景治中，王美兰，陈涑年．细叶杜香精油的色谱-质谱联用分析．色谱，1993；11(4)：244-245
20 金晓玲，杜红岩，杜兰英，李福海．超临界CO_2萃取技术研究现状及发展趋势．经济林研
究，2002：20(4)：71-74
21 李靖．杜香精油提炼技术．中国林副特产，1989；9：36-38
22 李菁，葛发欢，黄萧芬等．超临界CO_2萃取当归挥发油的研究，中药材，1996，19(4)：187-189
23 林翠英，周晶，赵晶等．芦丁超声提取新技术的再探索．中草药，1999；30(5)：350-351
24 林克勤．黑龙江省植物精油化学成分及其利用的研究．自然资源研究，1984；2：38-44
25 林克勤，宿伯杰．杜香精油利用与生产工艺研究．自然资源研究，1986；2：34-42
26 林克勤译．杜香生物活性物质．国土与自然资源研究，1995；1：73-76
27 李淑芬，陈宝良，韩金玉．超临界CO_2萃取天然产品的特性研究．化工进展，1997；2：10-14
28 李天祥，王静康．超临界CO_2流体萃取技术在天然物提取上的研究进展．天津大学学报，2002；35(4)：417-423
29 刘金荣，江发寿，但建明，王航宇，赵文斌．独尾草多糖的超声提取及含量测定．中草药，2002；33(4)：322-323
30 李晓蒙，廖华卫．夏枯草中熊果酸的含量测定．广东药学院学报，2002；18(1)：31-32
31 李志勇，郭勇，罗焕亮．香豆素类化合物——抗HIV天然药物．生命的化学，1999；19(4)：197-198
32 吕琳，朱宇明，钱用强，司云珊，张瑾．强肝消脂胶囊中熊果酸的含量测定．长春中医学院学报，1999；15(4)：56
33 骆望美，宓鹤鸣，黄河舟．超临界流体萃取技术在现代中药研究中的应用．．解放军药学学报，2001；18(6)：351-353
34 潘太安，彭励．超临界CO_2萃取葡萄籽油的研究．食品工业科技．2001，22(4)：22-24
35 彭洪，张镜澄，郭振德．超临界CO_2萃取技术在生理活性物质萃取上的应用．中国医药工业杂质，1995；26(11)：519-523
36 邱志国，尹成增，郭雪飞等．杜香油主要成分的分离和鉴定．东北林业大学学报，1997；25(11)：41-44
37 曲涛，宋立新，张微．细叶杜香空气杀菌实验．中医药信息，1996；6：37
38 沈红梅，程涛，乔传卓等．乌梅的体外抗肿瘤活性及免疫调节作用初探．中国中药杂志，1995；20(6)：365
39 孙爱东，葛毅强等．CO_2超临界流体萃取技术提取甜橙皮精油的研究．食品工业科技，1999；20(3)：7-8
40 孙爱东．CO_2超临界萃取技术提取麦胚芽油的研究．食品工业科技，1997，5：68-70
41 山原条二．药学杂志(日)1981，101(1)：86
42 史庆龙，林秀仙．超临界CO_2萃取技术在云南红豆杉化学成分研究中的应用．中药材，2001，24(5)：338-339
43 孙来九，王文丰，郭人民，赵立新．以枸骨叶为原料提取熊果酸的工艺研究．现代化工，2000；20(9)：47-48
44 孙燕，袁瑞荣，吴居等．齐墩果酸的促免疫作用．中国临床药理学杂志，1988；4(1)：26
45 隋晓，丛培江．超临界萃取技术在中草约提取中的应用进展．青岛大学学报，2001；16(2)：72-74
46 唐传核，彭志英．天然功能性植物化学成分开发现状．粮食与油脂，2001；3：38-40
47 王炎，赵敏．大兴安岭地区细叶杜香挥发性成分的研究．色谱，2003；21(6)：631-632
48 吴芳，刘新宇，陈连剑，郭华，范国荣．蛇床子总香豆素的测定及其提取条件的正交设计优选．中药新药与临床药理，2002；13(2)：113-117
49 辛柏福，于长华，么希平．黑龙江杜香精油的开发利用．黑龙江大学自然科学学报，1996；13(2)：114-116
50 徐德然，丁晴，王峥涛．HPLC法测定山茱萸及知柏地黄丸中齐墩果酸、熊果酸的含量．中草药，2002；33(11)：996-997
51 徐志远．长白山植物药志．吉林人民出版社，长春第863页
52 赵德修，王华亭，吴承顺等．狭叶杜香挥发油成分的初步研究．植物学报，1987；29(2)：189-192
53 杨海燕，王群，金伟．超临界CO_2流体萃取缬草精油的研究．新疆农业大学学报 1998；2(1)：43-46
54 杨劲松，哈永年，刘艳华．大兴安岭地区不同生长期和海拔高度越桔叶中熊果酸的含量测定．中国兽药杂志，1995；29(4)：37-39
55 杨涛，李静海．超临界流体萃取天然药物的研究现状及发展趋势．化工冶金，1997；18(4)：377-383
56 杨晓彤，程乐乐，糜可，周韵丽，杨庆尧．山楂核中熊果酸含量的HPLC测定．上海中医药大学学报，2001；15(3)：53-55
57 姚新生．天然药物化学．人民卫生出版社，2001；248-249
58 应崇福主编．超声学[M]．北京：科学出版社，1990：511
59 原春兰，李宗孝，杨佩云．地榆中熊果酸的提取．中国医药工业杂志，2002；33(10)：478-479
60 袁珂，董留民．HPLC法测定冬凌草中熊果酸、齐墩果酸的含量．中国实验方剂学杂志，
1998；4(6)：1-2
61 张晨，刘志伟．超临界CO_2萃取沙田柚皮精油的研究．农牧产品开发，2000；3：12-13
62 张镜澄．超临界流体萃取．化学工业出版社，2000年
63 张启兴，沈德凤，杨波，李艳翠．车前草中熊果酸的含量测定．中国野生植物资源，2001；20(4)：42-43
64 张新勇，向仁德．蛇床子化学成分的研究．中草药，1997；28(10)：588
65 赵世萍，陈玉武，付桂香．高压液相色谱法测定夏枯草中熊果酸的含量．中日友好医院学报，1996；10(3)：201-204
66 赵振东，王亚玲，杜晓光等．杜香精油主要组成及利用的研究．林产化工通讯，2001；35(5)：3-6
67 周俊，贺小江．加强我国植物化学研究．中国科学院院刊，2000；6：413-416
68 周以良等．黑龙江树木志．哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1984；460-461
69 周以良主编．中国大兴安岭植被．第一版．哈尔滨：科学出版社，1991；239
70 周以良主编．中国小兴安岭植被．第一版．哈尔滨：科学出版社，1994；310
71 朱铉，全香花，崔哲等．杜香萜烯对安定透皮吸收作用影响的研究．延边大学医学学报，1998；21(11)：29-31
72 佐建锋，郭增军，李教社．香豆素类化合物的药理研究进展．中药材，2003；26(9)：686-689
73 美国植物化学品产值快速增长．精细化工，2001；6(18)：368
74 Ames BN. Dietary carcinogens and ant carcinogens. Science, 1983,221:1256
75 Balanehru S, Nagarajan B. Protective effect of oleanolic acid and ursolic acid against ilpidper oxidation [J]. Biochen Int, 1991,24 (5): 981
76 Bol shakova IV, Lozovskaia EL, Sapezhinski Ⅱ Antioxidant properties of plant extracts. Biofizika, 1998, Mar-Apr 43: 186-188
77 Demagglo A E, Phar Sc Ovadia M E, et al. Pharm Sci, 1965; 54(7): 10-13
78 Huang MT, Ho CT, Wang ZY, et al. Inhibition of skin tumor genesis by rose mary and its constituents carnosol and ursolic acid [J]. Cancer Res,1994,54 (3): 701
79 Lee KH, Lin YM, Wu TS, et al. The cytotoxic principles of Prunella vulgaris, Psychotic ria serpens, and Hyptis capitata:ursolic acid and related derivatives [J].Planta Med,1988,54 (4): 308
80 Muto Y, Ninomiya M, Fujiki H. Present status of research on cancer chemoprevention in Japan [J]. Jpn J Clin Oncol, 1990,20 (3): 219
81 Narimanov AA. The ant radiation effectiveness of a mixture of Archangelica officinalis and Ledum palustre extracts in the fractionated gamma irradiation of mice [J],Radiobiological, 1993, Mar-Apr 33: 280
82 Narimanov AA. The reproductive capacity of male mice protected against the super lethal action of gamma radiation by the administration of a mixture of Archangelica officinalis and Ledum palustre extracts [J],Radeobiologiia, 1992, Mar-Apr 32:271-275
83 Narimanov AA,Miakisheva SN, Kuznetsova SM. The radio protective effect of extrccts of Archangelica officinalis and Ledum palustre L. on mice, Radeobiologiia [J], 1991, May-Jun 31:391-393
84 Niikawa M, Hayashi H, Sato T, et al. Isolation of substances from glossy privet(Ligature lucidum Ait)inhibiting the mutagenicity of benzo(α)pyrene in bacteria. Mutat Res,1993; 319 (1): 1
85 Simon A, Najid A, Chulia AJ, et al. Inhibition of lipoxygenase activity and HL60 leukemia cell proliferation by ursolic acid isolated from heather flowers (Callluna vulgaris)[J].Biochem Biophys Acta, 1992, 1125 (1): 68
86 Sohn KH, Lee HY, Chung HY, et al. Anti-angiogenic activity of triterpene acids [J]. Cancer Lett, 1995, Aug 1: 213
87 Young HS, Chung HY, Lee CK, et al. Ursolic acid inhibits aflatoxin Bl-induced mutagenicity in a Salmonella assay system [J]. Biol Pharm Bull, 1994,17 (7): 990i, 1964; 53 (8): 945-946
88 Ledum palustre 1..13 Ⅷ 1996: 74-82
89 paeoniaceae-Thymelaeaceae 1985; 336