当归补血汤中组分的分析方法及溶出效应研究
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摘要
当归补血汤是金元时代李东垣所创造的益气补血方剂，由黄芪、当归组成，具有补气生血的功能，临床用于某些疾病的治疗。近年来，对该方研究多集中在药理、药效方面，对化学成分及其化学组成与临床疗效的相关性研究甚少。本文在查阅大量国内外文献基础上，对当归补血汤化学成分进行了系列研究。建立了当归补血汤单煎及合煎液中微量元素、阿魏酸及糖类化合物分析新方法，并探讨了不同提取方法时，当归补血汤水煎液中化学成分溶出差异。其主要研究成果如下：
1．采用氢化物发生-原子荧光法测定当归补血汤中的微量硒元素。考查当归、黄芪以及两种药材以不同配伍形式的水煎液中硒的含量，比较了两种配伍形式的水煎液和采用不同提取方法时硒溶出率的差异。同时研究了磷脂类化合物对当归、黄芪以及两种药材两种配伍形式的水煎液中硒溶出率的影响。结果表明，原子荧光光谱法具有简便、快速、灵敏度高、准确度和精密度好、线性范围宽的优点，方法的回收率在93.82％～95.04％之间，且当归：黄芪为1：5时的水煎液中硒溶出率高于当归：黄芪为1：1时的水煎液中硒溶出率。
2．采用电感耦合等离子体原子发射光谱测定了当归、黄芪及两种药材不同配伍形式的水煎液中铅、铬、镉、砷等金属元素含量。比较了不同提取方法及磷脂类化合物对当归补血汤中这些金属元素溶出的影响。实验表明，当归、黄芪生药材及水煎液经硝酸消化，样品消解完全，能满足ICP-AES检测的要求。方法加标回收率为83.0％～96.0％，相对标准偏差为0.360％～4.67％，且当归：黄芪为1：5配比时水煎液中重金属元素溶出率低于1：1配比，证实了当归补血汤经典配方的合理性，为其临床疗效提供了有效依据。也研究了江西乌骨鸡提取的磷脂类化合物对当归补血汤中这些重金属元素溶出率的影响，以便更好开发利用当归补血汤的药用价值。
3．采用离子色谱法对当归补血汤中阿魏酸含量进行了测定。以0.055 mol／L NaOH为淋洗液，运用阴离子分离柱IonPac AS18柱(2×250mm)及相应的保护柱IonPac AG18(2×50mm)，系统地研究了阿魏酸与其共存组分色谱分离条件，建立了阿魏酸分析新方法。方法对所测阿魏酸检出限为0.2142 mg／L，线性相关系数为0.9999，回收率为96.67％～104.9％，用于当归补血汤中阿魏酸分析，获得满意结果。
4．建立了阴离子交换-脉冲安培检测当归补血汤中的阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、核糖和蔗糖新方法。以Carbopac PA10离子交换柱为色谱柱，0.055 mol／LNaOH水溶液为淋洗液，流速为0.18 mL／min对五种糖类化合物分离的色谱条件进行了系统研究。在优化的分离测定条件下，几种单糖和蔗糖的含量与其峰面积的线性关系良好，检出限为0.0038～0.2005 mg／L，回收率在89.37％～97.80％之间。方法简便易行。同时还探讨了当归补血汤单煎液及不同配比合煎液中五种糖类化合物溶出情况。
Danggui Blood-Supplementing Decoction is created by Li Dong-yan of the Jin-Yuan Dynasties. This herbal prescription is made up of Radix Astragali and Radix Angelicae Sinesis. This decoction is used to treat various clinical ailments and diseases as it benefits energy and nourish blood in our body system. In recent years, it is observed that majority of the research reports were mainly focused in the area of medical studies. However, the relationship between chemistry studies and clinical therapy are less researched on. This article, based on the foundation built from international survey, shows a series of researches on the chemical composition of Danggui Blo0d-Supplementing Decoction. It established a new method for the determination of trace dements, ferulic acid and carbohydrate compounds in Danggui Blood-Supplementing Decoction. It also investigated the differences between the solubility of the chemical compositions. The different ratio proportions and extraction method of Danggui Blood-Supplementing Decoction were compared for the trace elements, ferulic acid and carbohydrate compounds. The main researches as follow:
1. A new method for the determination of selenium in Danggui Blood-Supplementing decoction by atomic fluorescence spectrometry is proposed. Comparison was made between the contents and solubility of selenium in different decoction proportions and extraction methods. In the different decoction proportions, the effect of phospholipids on the solubility of selenium was investigated. The average recovery of selenium is in the range of 83.82％～95.04％. The solubility of selenium is higher in the ratio proportion of 1:5 (Radix Angelicae Sinesis: Radix Astragali, w/w), as compared to ratio proportion of 1:1. The method proved to be simple, rapid, sensitive and accurate.
2. A method for the determination of Pb, Cr, Cd, As in Danggui Blood-Supplementing decoction by inductively coupled plasma atomic emission spectrometry is proposed. Comparison was made between the contents and solubility of these heavy metal elements in different decoction proportions and extraction method. This experiment demonstrates that Radix Angelicae Sinesis decoction, Radix Astragali decoction and Danggui Blood-Supplementing are completely digested by nitric acid. This satisfies he requirements of the ICP-AES detector. The average recovery of this method for these heavy metal elements fall in the range of 83.0％～96.0％. The RSD is in the range of 0.36％～4.67％. In addition, the contents of heavy metal in the solution of ratio factor of 1:5 (Radix Angelicae Sinesis: Radix Astragali) are lower as compared to the ratio factor of 1:1. This result has backed up the rationale behind the classic formulation of Danggui Blood-Supplementing Decoction, as well as the s acknowledged beneficial clinical therapeutic effects. This research has also shown the effect of phospholipids compounds in Jiangxi black-bone silky fowl on the solubility of these heavy metal elements in different proportions of Danggui Blood-Supplementing Decoction. This aid develops the medicinal value of Danggui Blood-Supplementing Decoction appropriately,
3. The analysis on the content of ferulic acid in Radix Angelicae Sinesis Blood-Supplementing decoction is carried out by using an anion analytical column, a column including IonPac AS18 column (2*250mm) arid protective column, IonPac AG18 (2*50mm). The solvent used is 0.055mol/L NaOH. Studies are carried out on the chromatography separation conditions of the ferulic acid and other coexisting factors. A new method for the determination of ferulic acid was established. The method used to detect the content of ferulic acid was limited to 0.2142mg/L, with a resolution of 0.9999 and average recovery of 96.6％～104.9％. The outcome gave a satisfactory result for the content of ferulic acid in Danggui Blood-Supplementing Decoction.
4. A new method has been established to detect the content of Arabinose, Glucose, Fruotose, Riboss and Sucrose in Danggui Blood-Supplementing Decoction by using anion-exchange chromatography-integrated pulsed amperometric detection. The chosen chromatogram conditions are as followed: Carbopac PA10 anion analytical column is used as the chromatography column, 0.055mol/L NaOH as the solvent with a flow rate of 0.18mL/min. Studies has been carried out on the chromatogram separation condition of the carbohydrate. Under the optimized condition of the separation analysis, the peak area and resolution of the content of the various monosaccharides and Sucrose give good results. The limits of detection (LOD) of the various sugars are in the range of 0.0038～0.2005 mg/L, with an average recovery that falls in the range of 89.37％～97.80％. This method is easy and convenient to be carried out. At the same time, the differences in the solubility of carbohydrate in different Danggui Blood-Supplementing Decoction, using different extraction method is investigated.
1．采用氢化物发生-原子荧光法测定当归补血汤中的微量硒元素。考查当归、黄芪以及两种药材以不同配伍形式的水煎液中硒的含量，比较了两种配伍形式的水煎液和采用不同提取方法时硒溶出率的差异。同时研究了磷脂类化合物对当归、黄芪以及两种药材两种配伍形式的水煎液中硒溶出率的影响。结果表明，原子荧光光谱法具有简便、快速、灵敏度高、准确度和精密度好、线性范围宽的优点，方法的回收率在93.82％～95.04％之间，且当归：黄芪为1：5时的水煎液中硒溶出率高于当归：黄芪为1：1时的水煎液中硒溶出率。
2．采用电感耦合等离子体原子发射光谱测定了当归、黄芪及两种药材不同配伍形式的水煎液中铅、铬、镉、砷等金属元素含量。比较了不同提取方法及磷脂类化合物对当归补血汤中这些金属元素溶出的影响。实验表明，当归、黄芪生药材及水煎液经硝酸消化，样品消解完全，能满足ICP-AES检测的要求。方法加标回收率为83.0％～96.0％，相对标准偏差为0.360％～4.67％，且当归：黄芪为1：5配比时水煎液中重金属元素溶出率低于1：1配比，证实了当归补血汤经典配方的合理性，为其临床疗效提供了有效依据。也研究了江西乌骨鸡提取的磷脂类化合物对当归补血汤中这些重金属元素溶出率的影响，以便更好开发利用当归补血汤的药用价值。
3．采用离子色谱法对当归补血汤中阿魏酸含量进行了测定。以0.055 mol／L NaOH为淋洗液，运用阴离子分离柱IonPac AS18柱(2×250mm)及相应的保护柱IonPac AG18(2×50mm)，系统地研究了阿魏酸与其共存组分色谱分离条件，建立了阿魏酸分析新方法。方法对所测阿魏酸检出限为0.2142 mg／L，线性相关系数为0.9999，回收率为96.67％～104.9％，用于当归补血汤中阿魏酸分析，获得满意结果。
4．建立了阴离子交换-脉冲安培检测当归补血汤中的阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、核糖和蔗糖新方法。以Carbopac PA10离子交换柱为色谱柱，0.055 mol／LNaOH水溶液为淋洗液，流速为0.18 mL／min对五种糖类化合物分离的色谱条件进行了系统研究。在优化的分离测定条件下，几种单糖和蔗糖的含量与其峰面积的线性关系良好，检出限为0.0038～0.2005 mg／L，回收率在89.37％～97.80％之间。方法简便易行。同时还探讨了当归补血汤单煎液及不同配比合煎液中五种糖类化合物溶出情况。
Danggui Blood-Supplementing Decoction is created by Li Dong-yan of the Jin-Yuan Dynasties. This herbal prescription is made up of Radix Astragali and Radix Angelicae Sinesis. This decoction is used to treat various clinical ailments and diseases as it benefits energy and nourish blood in our body system. In recent years, it is observed that majority of the research reports were mainly focused in the area of medical studies. However, the relationship between chemistry studies and clinical therapy are less researched on. This article, based on the foundation built from international survey, shows a series of researches on the chemical composition of Danggui Blo0d-Supplementing Decoction. It established a new method for the determination of trace dements, ferulic acid and carbohydrate compounds in Danggui Blood-Supplementing Decoction. It also investigated the differences between the solubility of the chemical compositions. The different ratio proportions and extraction method of Danggui Blood-Supplementing Decoction were compared for the trace elements, ferulic acid and carbohydrate compounds. The main researches as follow:
1. A new method for the determination of selenium in Danggui Blood-Supplementing decoction by atomic fluorescence spectrometry is proposed. Comparison was made between the contents and solubility of selenium in different decoction proportions and extraction methods. In the different decoction proportions, the effect of phospholipids on the solubility of selenium was investigated. The average recovery of selenium is in the range of 83.82％～95.04％. The solubility of selenium is higher in the ratio proportion of 1:5 (Radix Angelicae Sinesis: Radix Astragali, w/w), as compared to ratio proportion of 1:1. The method proved to be simple, rapid, sensitive and accurate.
2. A method for the determination of Pb, Cr, Cd, As in Danggui Blood-Supplementing decoction by inductively coupled plasma atomic emission spectrometry is proposed. Comparison was made between the contents and solubility of these heavy metal elements in different decoction proportions and extraction method. This experiment demonstrates that Radix Angelicae Sinesis decoction, Radix Astragali decoction and Danggui Blood-Supplementing are completely digested by nitric acid. This satisfies he requirements of the ICP-AES detector. The average recovery of this method for these heavy metal elements fall in the range of 83.0％～96.0％. The RSD is in the range of 0.36％～4.67％. In addition, the contents of heavy metal in the solution of ratio factor of 1:5 (Radix Angelicae Sinesis: Radix Astragali) are lower as compared to the ratio factor of 1:1. This result has backed up the rationale behind the classic formulation of Danggui Blood-Supplementing Decoction, as well as the s acknowledged beneficial clinical therapeutic effects. This research has also shown the effect of phospholipids compounds in Jiangxi black-bone silky fowl on the solubility of these heavy metal elements in different proportions of Danggui Blood-Supplementing Decoction. This aid develops the medicinal value of Danggui Blood-Supplementing Decoction appropriately,
3. The analysis on the content of ferulic acid in Radix Angelicae Sinesis Blood-Supplementing decoction is carried out by using an anion analytical column, a column including IonPac AS18 column (2*250mm) arid protective column, IonPac AG18 (2*50mm). The solvent used is 0.055mol/L NaOH. Studies are carried out on the chromatography separation conditions of the ferulic acid and other coexisting factors. A new method for the determination of ferulic acid was established. The method used to detect the content of ferulic acid was limited to 0.2142mg/L, with a resolution of 0.9999 and average recovery of 96.6％～104.9％. The outcome gave a satisfactory result for the content of ferulic acid in Danggui Blood-Supplementing Decoction.
4. A new method has been established to detect the content of Arabinose, Glucose, Fruotose, Riboss and Sucrose in Danggui Blood-Supplementing Decoction by using anion-exchange chromatography-integrated pulsed amperometric detection. The chosen chromatogram conditions are as followed: Carbopac PA10 anion analytical column is used as the chromatography column, 0.055mol/L NaOH as the solvent with a flow rate of 0.18mL/min. Studies has been carried out on the chromatogram separation condition of the carbohydrate. Under the optimized condition of the separation analysis, the peak area and resolution of the content of the various monosaccharides and Sucrose give good results. The limits of detection (LOD) of the various sugars are in the range of 0.0038～0.2005 mg/L, with an average recovery that falls in the range of 89.37％～97.80％. This method is easy and convenient to be carried out. At the same time, the differences in the solubility of carbohydrate in different Danggui Blood-Supplementing Decoction, using different extraction method is investigated.
引文
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