中药色谱指纹图谱研究
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摘要
本论文采用二极管阵列检测器和电化学检测器，研究了中药活性成分含量测定的高效液相色谱方法及其指纹图谱。论文中所取得的研究成果对于中药材质量控制有重要意义，也为确定中药材GAP生产基地提供了依据。全文共分五章，作者的主要贡献有以下四个方面：
1、建立了不同品种、不同采收部位和不同采收时间绞股蓝HPLC指纹图谱，实验结果显示：不同采收部位、不同采收时间、不同品种绞股蓝药材的色谱图有较明显的差异，各成份含量亦不同。本研究为快速鉴别区分不同品种的药材提供科学的依据。
2、采用高效液相色谱法建立了测定天麻中主要活性成份天麻素等含量的方法，建立了天麻的高效液相色谱指纹图谱。实验结果表明：不同产地的天麻中主要活性成份含量有明显差别，但其含有的整体化学成分无明显差异。该法为天麻药材的鉴定提供了较全面的信息。
3、采用高效液相色谱法建立了测定喜树不同部位中喜树碱含量的方法，并通过对不同产地、不同部位和不同生长期喜树中的主要活性成份相对保留时间的计算获得其色谱指纹图谱。实验结果表明：不同产地喜树种子、不同部位喜树叶子和不同生长期喜树茎部的色谱指纹图谱中峰个数及形状有明显差别，其中叶子和茎部都有其特征色谱峰；且三者的喜树碱含量差异较大。该研究为我国喜树及喜树碱的产业化提供理论基础依据。
4、采用高效液相色谱电化学检测器，直接、连续测定了不同产地的葡萄酒中7种酚酸类化合物的含量，并建立了葡萄酒中酚酸类化合物的色谱指纹图谱。实验结果表明：7种酚酸得到很好的分离，其浓度与峰面积之间的线性关系良好，并且电化学检测器的检测灵敏度是光检测器的4～600倍，该研究成果为葡萄酒的质量控制提供了科学依据。
In this thesis, high performance liquid chromatography (HPLC) was applied to determine the contents of active components and to establish its chromatographic fingerprint in Traditional Chinese Medicine (TCM) by electrochemical detector (ECD) and diode array detector (DAD). Those studies are very important to control the quality of TCM, and can offer a basis for the Good Agricultural Practice (GAP) management. This thesis consisted of five chapters, and the author's contributions are in the following four aspects:
1. The chromatographic fingerprint of gynostemma pentaphyllum makino in different season and its different part was established by HPLC. The experimental results showed that the chromatograms of gynostemma pentaphyllum makino were obviously different in all samples, and the content is different in all samples. This investigation can provide a basis for the quality control of gynostemma pentaphyllum makino.
2. A new method for determination of the contents of active components in gastrodia elata blume was presented by HPLC, and an ideal fingerprint of gastrodia elata blume was established. Experimental results showed that the number and shape of peaks on chromatograms of the gastrodia elata blume obtained from some different resource were basically same, but content of gastrodin as a main component was obviously different in those samples. This investigation may provide some useful information for identification of gastrodia elata blume and a basis for the quality control of gastrodia elata blume. It is very important to management of GAP and to
exploitation and use of TCM.
3. A new method for determination of the contents of active components in camptotheca acuminate obtained form different resources was presented by HPLC, and an ideal fingerprint of camptotheca acuminata was established by calculation of the relative retention time and similarity of main active ingredients on the chromatograms of camptotheca acuminata. Experimental results showed that the number and shape of peaks on HPLC fingerprint of the camptotheca acuminata were different, but content of camptothecin as a main component was obviously different in the different samples; the contents in leafage were higher than that in seeds, which was superior to stems. This method will be useful in the future human studies with the industrialization of camptotheca acuminata and camptothecin.
4. To establish an HPLC-ECD method for determination of seven kinds of phenolic compounds in five different wine samples simultaneously, and an ideal fingerprint of wine was established by HPLC-ECD. The experimental results showed that seven kinds of phenolic compounds are separated satisfactorily and there are some good linear relationship between their concentration and peak area. When ECD was applied, the sensitivity of phenolic compounds is 4~600 times than that obtained with UV detection. The study may provide a scientific basis for the quality control and research of wine.
1、建立了不同品种、不同采收部位和不同采收时间绞股蓝HPLC指纹图谱，实验结果显示：不同采收部位、不同采收时间、不同品种绞股蓝药材的色谱图有较明显的差异，各成份含量亦不同。本研究为快速鉴别区分不同品种的药材提供科学的依据。
2、采用高效液相色谱法建立了测定天麻中主要活性成份天麻素等含量的方法，建立了天麻的高效液相色谱指纹图谱。实验结果表明：不同产地的天麻中主要活性成份含量有明显差别，但其含有的整体化学成分无明显差异。该法为天麻药材的鉴定提供了较全面的信息。
3、采用高效液相色谱法建立了测定喜树不同部位中喜树碱含量的方法，并通过对不同产地、不同部位和不同生长期喜树中的主要活性成份相对保留时间的计算获得其色谱指纹图谱。实验结果表明：不同产地喜树种子、不同部位喜树叶子和不同生长期喜树茎部的色谱指纹图谱中峰个数及形状有明显差别，其中叶子和茎部都有其特征色谱峰；且三者的喜树碱含量差异较大。该研究为我国喜树及喜树碱的产业化提供理论基础依据。
4、采用高效液相色谱电化学检测器，直接、连续测定了不同产地的葡萄酒中7种酚酸类化合物的含量，并建立了葡萄酒中酚酸类化合物的色谱指纹图谱。实验结果表明：7种酚酸得到很好的分离，其浓度与峰面积之间的线性关系良好，并且电化学检测器的检测灵敏度是光检测器的4～600倍，该研究成果为葡萄酒的质量控制提供了科学依据。
In this thesis, high performance liquid chromatography (HPLC) was applied to determine the contents of active components and to establish its chromatographic fingerprint in Traditional Chinese Medicine (TCM) by electrochemical detector (ECD) and diode array detector (DAD). Those studies are very important to control the quality of TCM, and can offer a basis for the Good Agricultural Practice (GAP) management. This thesis consisted of five chapters, and the author's contributions are in the following four aspects:
1. The chromatographic fingerprint of gynostemma pentaphyllum makino in different season and its different part was established by HPLC. The experimental results showed that the chromatograms of gynostemma pentaphyllum makino were obviously different in all samples, and the content is different in all samples. This investigation can provide a basis for the quality control of gynostemma pentaphyllum makino.
2. A new method for determination of the contents of active components in gastrodia elata blume was presented by HPLC, and an ideal fingerprint of gastrodia elata blume was established. Experimental results showed that the number and shape of peaks on chromatograms of the gastrodia elata blume obtained from some different resource were basically same, but content of gastrodin as a main component was obviously different in those samples. This investigation may provide some useful information for identification of gastrodia elata blume and a basis for the quality control of gastrodia elata blume. It is very important to management of GAP and to
exploitation and use of TCM.
3. A new method for determination of the contents of active components in camptotheca acuminate obtained form different resources was presented by HPLC, and an ideal fingerprint of camptotheca acuminata was established by calculation of the relative retention time and similarity of main active ingredients on the chromatograms of camptotheca acuminata. Experimental results showed that the number and shape of peaks on HPLC fingerprint of the camptotheca acuminata were different, but content of camptothecin as a main component was obviously different in the different samples; the contents in leafage were higher than that in seeds, which was superior to stems. This method will be useful in the future human studies with the industrialization of camptotheca acuminata and camptothecin.
4. To establish an HPLC-ECD method for determination of seven kinds of phenolic compounds in five different wine samples simultaneously, and an ideal fingerprint of wine was established by HPLC-ECD. The experimental results showed that seven kinds of phenolic compounds are separated satisfactorily and there are some good linear relationship between their concentration and peak area. When ECD was applied, the sensitivity of phenolic compounds is 4~600 times than that obtained with UV detection. The study may provide a scientific basis for the quality control and research of wine.
引文
1 蔡宝昌，潘扬，殷武．指纹图谱在中药研究中的应用．世界科学技术-中药现代化．2000，2(5)：9
2 任德权．抓住机遇、迎接挑战—在中药指纹图谱和中药工程上的报告．中成药，2002，24(1)：1
3 谢培山．中药制剂色谱指纹图谱(图像)鉴别．中成药．2000，22(6)：391
4 谢培山．中医药文化与现代质量控制．中国中西医结合杂志．1998，18(1)：645
5 侯小平，何新新，苏薇薇．中药指纹图谱质量控制技术．中药材．2001，24(5)：370
6 谢培山，中药色谱指纹图谱鉴别的概念，属性技术与应用．中国中药杂志，2001，26(10)：653
7 O. Sticher. Quality of Ginkgo preparations Planta Medica, 1993, (59): 2
8 国家药品技术管理局．中药注射剂指纹图谱研究的技术要求．中国药品标准，2000，1(4)：3
9 任德权．中药指纹图谱质控技术的意义及作用．中药新药与临床药理．2001，12(3)：135
10 曹进，饶毅，沈群等．中药注射剂指纹图谱分析．世界科学技术-中药现代化．2001，3(4)：20
11 袁久荣，袁浩．中药质量控制与方法学研究．中国药学杂志．2001，36(8)：566
12 李玉娟，王瑞，车镇涛等．中药材指纹图谱质量控制方法研究．中药新药与临床药理．2001，12(3)： 192
13 程翼宇，陈闽军．中药质量控制方法初探．科技通报．2000，16(4)：55
14 Rudolf Bauer. Quality Criteria and Phytopharmacuticals: Can Acceptable Drug Standards be achieved. Drug Information Journal, 1998, 32: 101
15 罗国安，王义明．中药指纹图谱的分类和发展．中国新药杂志．2002，11(1)：46
16 梁逸曾．浅议中药色谱指纹图谱的意义，作用及可操作性．中药新药与临床药理．2001，12(3)：196
17 谢培山．色谱指纹图谱分析是中草药质量控制的可行性策略．中药新药与临床药理．2001，12(3)： 141
18 屠鹏飞．中药指纹谱制定的方法学探讨．国际色谱指纹图评价中药质量研讨会学术报告论文集．111
19 洪筱坤，王智华．色谱指纹图谱在中药质量标准研究中的应用．中成药．2001，23(3)：157
20 张汉明，许铁峰，秦路平等．中药鉴别研究的发展和现代鉴别技术介绍．中成药．2000，22(1)：101
21 屠鹏飞．高效液相色谱法制定中药材和中药注射剂特征指纹图谱探讨，中成药，2000，22(7)：516
22 沙明，王嘉仡，曹爱民等．HPLC指纹图谱技术在中药新药质量控制中的应用，中草药，2002，33(2)： 181
23 刘慧琼，郭书好．现代仪器与中药指纹图谱．中国医学报，2002，30(2)：35
24 聂晶，田颂九，王国荣．中药指纹图谱的研究现状．中草药，2000，31(12)：881
25 沈智斌．中药指纹图谱的研究现状，哈尔滨商业大学学报．2001，17(3)：14
26 沈平孃．高速逆流色谱(HSCCC)技术与色谱指纹谱．中成药，2001，23(5)：313
27 张文生，叶正良，岳洪水等．丹参药材指纹图谱研究．中药材，2001，24(7)：478
28 贾晓斌，施亚芳，黄一平等．人参皂苷成分的HPLC指纹图谱研究．中药材，2001，24(10)：722
29 贾晓斌，施亚芳，陈彦等．复方人参注射液的HPLC指纹图谱研究．中成药，2002，24(4)：243
30 张聪，王智华，金德庄．中国红参与高丽红参的指纹谱(HPLC-FPS)比较研究．中成药，2001，23(3)： 160
31 游松，王亮，蒋雅红等．银杏叶注射剂指纹图谱的研究．中草药，2002，33(3)：216
32 颜玉贞，卢平华，谢培山．西青果与诃子进行了HPLC指纹图谱鉴别研究．中药新药与临床药理．2001，12(3)：173
33 黄茂华，雍克岚．棕榈科麒麟血竭和百合科剑叶血竭的HPLC指纹图谱分析与比较．上海大学学报(自然科学版)，2001，7(4)：326
34 洪筱坤，王智华，李旭．HPLC-相对保留值指纹谱法鉴别大黄．，中国中药杂志，1993，18(11)：650
35 朱莲花．不同产地何首乌的质量分析．中成药，1999，21(1)：36
36 张亮，刘展鹏，杨春．六味地黄丸缺味药的Bayers和PRIMA法定性识别．中国中药杂志，2000，25(1)：29
37 O. Sticher. Quality of Ginkgo preparations Planta Medica, 1993, (59): 2
38 杨斌，黄璐琦，姚三桃等．防风类药材高效液相色谱鉴别．中国药学杂志，1999，34(10)：658
39 石先哲，杨军，赵春霞等．色谱指纹图谱在参麦注射剂质控中的应用．色谱，2002，20(4)：299
40 曾志，杨东晖，宋立飞等．高效液相色谱指纹图谱应用于板蓝根的鉴定．分析化学，2002，30(7)：849
41 翟为民，袁永生，周玉新等．人参、西洋参及三七指纹图谱鉴别．中国中药杂志，2001，26(7)：481
42 周玉新，袁永生，高霞等．三七药材及其制剂指纹图谱研究．中国中药杂志，2001，26(2)：122
43 刘丽娟，张清波，张树杰．刺五加药材指纹谱(HPLC-FPS)分析方法研究及不同产地药材谱比较．中成药，2001，23(11)：781
44 徐艳春，魏璐雪，周玉新等．红车轴草中异黄酮类的指纹图谱研究．中国中药杂志，2002，27(3)： 196
45 王新宏，安睿，邹云等．数字化色谱指纹谱技术在双黄连制剂质量及药材鉴定中的应用．中草药，2002，33(2)：115
46 张子忠，梁鑫淼，张青等．黄芪特征组分的表征与识别．药学学报，2001，36(7)：523
47 谢培山．中药制剂色谱指纹图谱(图像)鉴别．中成药，2000，22(6)：391
48 陈蕴，孙天翰，郭进武等．东亚钳蝎蝎毒的指纹图谱．河南医科大学学报，2001，36(6)：661
49 张文婷，何翱，陈浩．连翘的HPLC指纹图谱研究．中国中药杂志，2002，27(5)：357
50 周晓英，张立新，张良等．红花的HPLC指纹图谱分析方法研究．中成药，2002，24(5)：325
51 杨光明，蔡宝昌，潘扬等．川芎药材指纹图谱研究与产地比较．南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(3)：172
52 李菁．HPLC-ELSD法在注射用七叶皂苷钠质量控制中的应用．中草药，2000，31(8)：582
53 Park M k, Park J H，Han S B，Shin Y G，Park I H．J．Chromatogr．A，1996，736：77
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55 徐青，王加宁，肖红斌等．黄芪药材的指纹图谱研究方法的建立．分析测试学报，2002，21(2)：89
56 戴德舜，曹进，王义明等．桂枝汤A部分指纹图谱的确定及比较(一)．中国实验方剂学杂志，2001，7(2)：1
57 曹进，戴德舜，，王义明等．桂枝汤A部分有效成分指纹图谱归属(二)．中国实验方剂学杂志，2001，7(3)：1
58 王颖，陈新法，盛龙生．三七注射液指纹图谱的L C/M S测定．中药新药与临床药理，2001，12(3)： 61
59 张子忠，梁鑫淼，张青等．中药配伍的统一分析方法研究Ⅰ．单味药与复方的分离、特征祖分的识别以及指纹对比．色谱，2001，19(3)：239
60 粟晓黎，林瑞超，王兆基等．中药毒性成分HPLC/UV指纹图谱分析方法研究与威灵仙、龙胆草HPLC图谱比较．中成药，2000，22(12)，819
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62 魏刚，符红，王淑英等．GC-MS法建立广藿香挥发油指纹特征图谱研究，中成药，2002，24(6)：407
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64 乔延江，吴刚，王玺等．中药蟾酥质量的人工神经网络化学模式识别研究分析化学，1995，23(6)： 630
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66 周福添，徐树棋，王兆基等．化学计量学方法应用于中药化学特征指纹图谱．中药新药与临床药理．2001，12(3)：164
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68 姚美村．黄芪药效物质基础与其评价指标的研究．沈阳药科大学博士学位论文．沈阳，2000．
69 齐莹．黄芪质量评价方法的研究．沈阳药科大学硕士学位论文．沈阳，1999．
70 何为．吴茱萸质量的化学人工神经网络模式识别．沈阳药科大学博士学位论文．沈阳，1998．
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72 罗序，毕开顺，王玺等．中药质量化学模式识别研究的进展．药学学报，1993，28(11)：937
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2 任德权．抓住机遇、迎接挑战—在中药指纹图谱和中药工程上的报告．中成药，2002，24(1)：1
3 谢培山．中药制剂色谱指纹图谱(图像)鉴别．中成药．2000，22(6)：391
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51 杨光明，蔡宝昌，潘扬等．川芎药材指纹图谱研究与产地比较．南京中医药大学学报(自然科学版)，2002，18(3)：172
52 李菁．HPLC-ELSD法在注射用七叶皂苷钠质量控制中的应用．中草药，2000，31(8)：582
53 Park M k, Park J H，Han S B，Shin Y G，Park I H．J．Chromatogr．A，1996，736：77
54 罗国安，王义明，曹进．多维多息特征谱及其应用．中成药，2000，12(6)：395
55 徐青，王加宁，肖红斌等．黄芪药材的指纹图谱研究方法的建立．分析测试学报，2002，21(2)：89
56 戴德舜，曹进，王义明等．桂枝汤A部分指纹图谱的确定及比较(一)．中国实验方剂学杂志，2001，7(2)：1
57 曹进，戴德舜，，王义明等．桂枝汤A部分有效成分指纹图谱归属(二)．中国实验方剂学杂志，2001，7(3)：1
58 王颖，陈新法，盛龙生．三七注射液指纹图谱的L C/M S测定．中药新药与临床药理，2001，12(3)： 61
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