实时荧光定量TaqMan探针法早期诊断日本血吸虫感染方法学的建立
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- 论文作者：董盼盼 ; 杨俊齐
- 年：2016
- 作者机构：卫生部寄生虫病预防与控制重点实验室江苏省寄生虫病分子生物学重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所;
- 论文关键词：日本血吸虫 ; 实时荧光定量TaqMan探针法 ; 特异性基因 ; 早期诊断
- 会议召开时间：2016-08-08
- 会议录名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会论文摘要集
- 英文会议录名称：The Abstracts of the Tenth Symposium for Yong Scientists of China Society of Parasitology
- 语种：中文
- 分类号：R532.21
- 学会代码：JISC
- 会议名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会
- 会议地点：中国四川成都
- 主办单位：中国动物学会寄生虫学专业青年委员会
- 学会名称：中国动物学会寄生虫学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：588k
- 原文格式：D
- 会议级别：全国
摘要
目的:本研究拟通过筛选日本血吸虫的保守性好、重复度高的特异性基因,建立实时荧光定量Taq Man探针法早期诊断日本血吸虫感染的方法学。方法:通过查找大量文献,确定日本血吸虫基因组DNA中的4个多拷贝序列:18S小亚基单位核糖体核酸基因(18SrR NA)序列(序列号:AY157226.1)、Sjrh1.0(序列号:U92488.1)、逆转录转座子SjR 2的G55A序列(G55A)(序列号:AF412221.1)和线粒体基因NADH-Ⅰ(序列号:AF215860),设计SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR引物及Taq Man探针法引物、探针。以日本血吸虫成虫、阳性钉螺、病人血清的基因组DNA为模板进行检测,以弓形虫和肺吸虫及病人感染血清作对照。结果:所选四个特异性基因在以日本血吸虫成虫、阳性钉螺、病人血清的基因组DNA为模板进行检测时,均分别出现特异性扩增,琼脂糖电泳无杂带;而对照组中均出现非特异性扩增,琼脂糖电泳有杂带。且Taq Man探针法的敏感性可达到10fg,特异性亦高于SYBR GreenⅠ染料法,3h内完成,感染后检测到阳性结果时间缩短到1周。结论:运用实时荧光定量Taq Man探针法检测日本血吸虫感染阳性钉螺及病人,早期、快速、灵敏、特异性高。
引文