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B细胞活化因子及其受体在B淋巴细胞感染人巨细胞病毒时的表达及对B细胞生长及功能的影响
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摘要
目的:前期研究发现,肾移植患者伴发巨细胞病毒(HCMV)感染时B细胞活化因子(BAFF)信号增强、抗HCMV pp65-IgG和血清总IgG水平显著增高。提示移植患者伴发HCMV感染诱导或增强了BAFF信号。为进一步研究HCMV感染对B细胞表达BAFF受体水平、细胞生长及抗体分泌能力的影响,开展了本项研究。方法:从扁桃体组织中分离纯化CD19+B细胞,以人HCMV病毒株(HCMV AD-169)刺激B细胞1、3、5、7天,分别流式检测细胞表面CD19、BAFF-R、TACI和BCMA表达水平;流式检测细胞早期凋亡率;酶联法检测上清中IgG浓度。以CpG ODN2006及其阴性对照物、CpG ODN4084F、poly(I:C)为对照物,设立对照组。为观察BAFF/BAFF-R信号在HCMV刺激B细胞过程中对B细胞的作用,研究中设重组BAFF蛋白刺激组,另外设中和性抗BAFF-R抗体阻断组,分别于HCMV刺激前2小时或刺激后2小时加入培养体系,培养时间为5天,检测项目同上。采用SPSS17.0软件进行统计分析,p<0.05被认为具有统计意义。结果:HCMV刺激后,B细胞上BAFF分子表达轻微上调,而BAFF-R表达维持在高水平并略有升高、TACI和BCMA的表达没有显著改变。HCMV刺激并不显著增加B细胞凋亡率。自HCMV刺激第3天起,B细胞分泌IgG水平显著增高(p<0.001);而ODN2006能够刺激B细胞分泌更高水平IgG。B细胞在重组BAFF蛋白刺激下,第5天时IgG水平略有增高,但是第7天时,IgG分泌能力显著加强。其余对照物对B细胞分泌IgG能力没有明显作用。B细胞以中和性抗BAFF-R抗体预处理后,再以HCMV刺激,则细胞凋亡率显著上升(p<0.05)。而以中和性抗体预处理后,再以ODN2006处理,细胞凋亡率亦是显著上升(p<0.05)。细胞培养上清中IgG检测结果显示,中和性抗体处理先后并不对HCMV刺激B细胞分泌IgG能力有明显影响,但是中和性抗体预处理再以ODN2006刺激,则使细胞分泌IgG水平显著下调(p<0.01)。结论:HCMV感染可在一定时间范围内增强HCMV/TLR9信号;HCMV/TLR9信号与BAFF/BAFF-R串话,并在一定程度上抑制B细胞凋亡。
引文

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