2-型登革病毒非结构蛋白NS3的表达及与其相互作用蛋白的亲和纯化
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- 论文作者：翁代慧 ; 吕欣 ; 张芳琳 ; 韩佩君 ; 徐志凯 ; 尹文 ; 雷迎峰
- 年：2015
- 作者机构：基础部微生物学教研室;
- 论文关键词：登革病毒 ; NS3 ; 串联亲和纯化
- 会议召开时间：2015-09-03
- 会议录名称：第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛论文汇编
- 语种：中文
- 分类号：R373
- 学会代码：WSWZ
- 会议名称：第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
- 会议地点：中国湖南长沙
- 主办单位：中国微生物学会临床微生物学专业委员会、医学参考报社、宁波大学医学院附属医院
- 学会名称：中国微生物学会临床微生物学专业委员会
- 页数：1
- 文件大小：48k
- 原文格式：O
- 会议级别：全国
摘要
目的构建2-型登革病毒(dengue virus-2,DENV-2)非结构蛋白NS3与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化法(tandem affinity purification,TAP)获得与NS3相互作用的蛋白。方法根据DENV-2基因序列,设计引物并交由公司化学合成;以DENV-2 cDNA为模板,PCR扩增出NS3基因,经酶切后克隆至含有串联亲和标签(FLAG-StrepII)的哺乳真核表达载体pCI-SFTAP,获得重组表达质粒pCI-NS3-SFTAP;将上述重组质粒通过转染试剂Lipofectamine 2000瞬时转染进入293T细胞,Western blot验证NS3融合蛋白的表达;通过串联亲和纯化的方法分离纯化与NS3相互作用的蛋白。结果成功构建了NS3融合蛋白表达载体,利用串联亲和纯化系统分离得到了与NS3蛋白相互作用的宿主蛋白。结论串联亲和纯化法是一种有效的分离与NS3相互作用的细胞蛋白的方法,该研究为进一步鉴定与研究登革病毒的复制机理奠定了实验基础。
引文