USP7在机体抗病毒固有免疫反应中的负向调控作用及相关机制研究

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• 论文作者：蔡娟 ; 张君
• 年：2016
• 作者机构：北京大学医学部基础医学院免疫学系;
• 论文关键词：USP7 ; TRIM27 ; TBK1 ; RIG-I信号通路
• 会议召开时间：2016-11-04
• 会议录名称：第十一届全国免疫学学术大会摘要汇编
• 英文会议录名称：Abstracts of 2016 CSI Congress on Immunology
• 语种：中文
• 分类号：R392
• 学会代码：IGMD
• 会议名称：第十一届全国免疫学学术大会
• 会议地点：中国安徽合肥
• 主办单位：中国免疫学会
• 学会名称：中国免疫学会
• 页数：2
• 文件大小：1297k
• 原文格式：D
• 会议级别：全国

摘要

研究背景和目的:RIG-I信号通路是机体识别胞内病毒的重要机制,通过RIG-I受体识别病毒分子后触发下游一系列信号转导,最终导致I型干扰素的产生,从而发挥着重要的抗病毒作用,此信号通路传导的多个步骤受到正负两方面严格的调控。去泛素化调节是固有免疫的重要调节方式。研究报道USP21、USP17、USP3作用于RIG-I受体,使其发生去K63多泛素链,从而负向调控信号通路;USP4作用于RIG-I受体,使其发生K48位的去泛素化,维持RIG-I蛋白的稳定性,进而正向调控固有免疫信号通路。USP7是USP家族的重要成员,研究发现USP7维持p65蛋白的稳定性进而正向调控NF-κB信号通路,有意思的是USP7可以协助DNA病毒HSV-1逃避免疫系统的攻击,那么USP7在RNA病毒诱导的RIG-I信号通路是如何发挥作用的呢?我们对此开展了一系列研究。方法:1)利用双荧光素酶报告基因检测方法发现USP7对Se V病毒诱导的RIG-I信号通路的作用;2)采用过表达/敲低及Cas9敲除USP7等方法,Se V病毒刺激不同时间点检测下游靶基因IFNB1,ISG15,ISG56的表达水平、VSV病毒复制水平、关键分子TBK1及转录因子IRF3的磷酸化水平;3)免疫共沉淀技术检测蛋白的相互作用;4)CHX处理Cas9 USP7敲除细胞,比较WT和KO细胞中TBK1的蛋白稳定性;5)检测WT和KO细胞中TBK1的内源性泛素水平。结果:1)USP7能够明显抑制Se V病毒及TBK1诱导的IFN-β及ISRE报告基因的激活且具有剂量依赖性;2)USP7能抑制Se V病毒诱导的下游靶基因IFNB1的mRNA水平;3)USP7能促进VSV病毒在细胞内的复制水平;4)USP7能抑制下游TBK1和转录因子IRF3的磷酸化水平;5)Se V刺激能增强USP7与TRIM27的结合;6)USP7能协同TRIM27抑制TBK1诱导的IFN-β及ISRE报告基因的激活,同时协同TRIM27促进TBK1的降解;7)敲低或敲除USP7抗病毒固有免疫增强,且在稳敲USP7的Hela细胞系中TBK1的半衰期延长,其泛素化水平降低。结论:USP7通过稳定泛素E3连接酶TRIM27,促进其泛素化降解抗病毒固有免疫信号通路中的激酶TBK1,进而负向调控RIG-I信号通路。

引文