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挥发性脂肪酸对瘤胃上皮细胞增殖和其吸收相关基因表达的影响
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摘要
本试验研究不同挥发性脂肪酸对山羊瘤胃上皮细胞活力及吸收基因的影响,为通过日粮调控瘤胃上皮吸收提供参考依据。试验通过在无血清的DMEM/F12生长培养基中添加15 mmol/L的挥发性脂肪酸钠,各组分别为对照组、A组(乙酸钠)、B组(丙酸钠)、C组(丁酸钠),各处理组使用5%葡萄糖溶液平衡能量,且使用1N HCl调整pH至7.1。原代山羊瘤胃上皮细胞接种到6孔板中,每组3个重复,待细胞长至约70%时,加入饥饿培养基(DMEM/F12和2%双抗)饥饿培养16 h,加入各组处理液,培养6 h、12 h、24 h后使用CCK8法测定细胞活力的变化。处理液培养12 h后提取细胞RNA,使用RT-PCR法测定瘤胃上皮细胞吸收相关的基因表达量。结果表明,各组细胞增殖活力随着培养时间延长而增加,处理后6 h、12 h、24 h,对照组的细胞活力均显著高于VFA处理组(P<0.05)。处理后12 h、24 h,丙酸钠组细胞活力增长较快,极显著高于乙酸钠组和丁酸钠组(P<0.01)。处理液培养12 h的RT-PCR结果表明,对照组的单羧酸转运蛋白1(Monocarboxylic acid transporter 1,MCT1)和MCT4的基因表达在数值上均高于处理组,对照组的MCT1基因表达量显著高于乙酸钠组(P<0.05),MCT4基因表达量显著高于丙酸钠组和丁酸钠组(P<0.05)。丁酸钠组的vH~+-ATP酶泵(Vacuolar H+ATPase subunit B,vH~+ATPase)基因表达显著高于对照组和乙酸钠组(P<0.05)。对于假定阴离子转运蛋白1(Putative anion transporter 1,PAT1)的基因表达,处理组均极显著高于对照组(P<0.01),且乙酸钠组和丁酸钠组显著高于丙酸钠组(P<0.05)。丁酸钠组的阴离子交换载体2(Anion exchanger2,AE2)和Na~+/H~+交换蛋白1(Na~+/H~+exchanger 1,NHE1)基因表达量极显著高于其他各组(P<0.01)。结论:体外培养瘤胃上皮细胞过程中,不同短链脂肪酸钠对细胞活力存在抑制作用,且乙酸钠和丁酸钠对细胞活力的抑制效果较丙酸钠更显著。不同短链脂肪酸钠会降低转运细胞内SCFA~-及其代谢产物的MCT基因表达,但会提高交换细胞内外SCFA~-和HCO_3~-离子的PAT1和AE2基因的表达。
引文

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