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烟草丛顶病毒不同分离物中p35蛋白的差异表达机制
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摘要
烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)属于番茄丛矮病毒科幽影病毒属。TBTV基因组由一条正义单链RNA(+ssRNA)组成,编码4个ORF,5′端缺乏帽子结构(m7GPPPN),3′末端也不带poly(A)尾。p35(ORF1)蛋白是通过不依赖帽子翻译机制而表达,核心调控元件为类BTE元件(最早在BYDV中发现)。通过萤火虫荧光素酶(Fluc)载体和TBTV全长RNA的体外翻译分析,表明其核心组件为可能结合eIF4E的SL-I以及与5′UTR形成远距离RNA-RNA互作的SL-ⅢB;并且其结构稳定性对于p35的不依赖帽子翻译也至关重要。TBTV不同分离物的体外翻译实验表明,p35蛋白的表达呈现约3倍的差异。通过嵌合病毒的翻译分析,定位了造成p35蛋白表达差异的调控区域:RI区(基因组5′端的500nt)和RV区[3′端的3 138nt到3 885nt区间[包含类BTE元件]。进一步的突变实验表明,RV区对于p35差异表达的调控并不是由于类BTE元件内的核苷酸突变;而发生在RV区中BTE元件区域之外的核苷酸突变也仅造成p35的细微变化。而通过RNA结构预测,在p35表达量低的TBTV分离物和嵌合病毒中均发现具有典型BTE结构的比例很低;而p35表达量高的TBTV分离物则拥有高比例的典型BTE结构特征。RI区对于p35蛋白的差异表达的调控机理正在研究中。因此,TBTV不同分离物的p35差异表达的内在机制部分源自于BTE区域的结构进化。
引文

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