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拟穴青蟹钙网蛋白低温胁迫作用研究
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摘要
蟹钙网蛋白(calreticulin,CRT)主要存在于内质网和肌浆网,不仅作为细胞内质网的分子伴侣参与新生蛋白的折叠及调节细胞内Ca~(2+)平衡,而且具有促进细胞黏附、调节免疫应答等重要作用。为探讨CRT在拟穴青蟹(Scylla paramamosain)低温胁迫中的作用,本研究采用RT-PCR、RACE等技术,获得的SpCRT基因全长为1680 bp,开放阅读框长度为1221bp,编码406个氨基酸。同源分析显示,该蛋白具有3个保守的功能结构域。经实时定量PCR检测,SpCRT基因在肝胰腺组织中表达量最高。4个温度条件(10℃、15℃、20℃和25℃)下,该基因的表达量在10℃最高,显著高于其余温度组;15℃下的表达量显著高于20℃和25℃组。SpCRT基因在10℃和15℃下的高表达,表明它可能参与了青蟹低温胁迫中的蛋白折叠等过程。在低温-盐度联合实验中,相同低温(10℃或15℃)下,肝胰腺中SpCRT在盐度10的表达量显著高于盐度35,说明在低温条件下,低盐度对青蟹的胁迫要大于高盐度。此外,肝胰腺中Ca~(2+)相对含量在低温(10℃)应激后出现上调。在体外培养的肝胰腺细胞中,随着添加的Ca~(2+)增加,SpCRT基因的表达量也逐渐增加。我们推测低温应激时Ca~(2+)起着低温信号传递的作用,可能会激活SpCRT等与耐寒相关基因的表达。该结果可为青蟹的健康养殖和耐寒机制研究提供理论指导。
引文

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