重力对血小板功能影响的研究
摘要
目的:研究重力改变对血小板生理功能的影响,并对其分子机制进行研究。 方法:抽取健康志愿者静脉血,分离获得血小板。利用超低速离心机和细胞旋转培养装置(RCCS)分别对血小板进行超重(8G)和模拟微重处理。通过血小板的聚集实验、流动腔(Flow chamber)实验以及小鼠尾出血实验检测超重或模拟微重处理后体外血小板的聚集功能、粘附功能和体内血小板的生理止血功能,并对超重处理导致死亡小鼠的心、脑、肺等进行组织染色和免疫组化。通过流式细胞仪检测超重或模拟微重处理后血小板膜表面主要粘附受体蛋白GPIb的膜表达量。通过梯度离心法将血小板分离成细胞骨架、膜骨架以及胞质可溶三个组分,western—blotting检测GPIbα在血小板不同组分中的分布情况。 结果:模拟微重处理后Ristocetin和collagen诱导的血小板最大聚集率下降,血小板粘附到vWF表面的功能下降,此外,小鼠的尾出血时间延长。相反,超重处理后相同诱导剂诱导的血小板聚集功能增强、粘附到vWFF表面的功能增强,小鼠尾出血时间相应缩短。在超重处理的23只小鼠中,有三只在超重过程中或超重后死亡,组织染色和免疫组化结果发现死亡小鼠的心室以及心、脑、肺等器官的血管中弥散着血栓。流式细胞仪检测结果显示模拟微重处理后血小板GPIbα在膜上表达量减少,超重处理后血小板GPIbα在膜上表达量增加。Western-blotting结果发现模拟微重处理后GPIbα在血小板细胞骨架和膜骨架上的分布减少,在胞质可溶组分中增加,提示GPIbα从细胞骨架系统向胞质可溶部分转移;相反,超重处理后GPIbα在在血小板细胞骨架和膜骨架上的分布增多,在胞质可溶组分中减少,提示GPIbα从胞质可溶部分向细胞骨架系统转移。 结论:在模拟微重力环境下血小板功能被抑制,而在超重环境下血小板功能增强;不同重力环境下血小板膜表面主要粘附受体GPIbα与血小板骨架系统连接的改变,及其所导致的GPIbα在血小板表面达量的不同是导致血小板功能发生改变的原因。