铜绿微囊藻胞内毒素microcystin-LR提取条件的优化

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• 作者：任晶王祥荣郝孟丽
• 会议时间：2009-11-01
• 关键词：铜绿微囊藻 ; 胞内毒素 ; 提取工艺 ; 条件优化
• 作者单位：复旦大学环境科学与工程系,上海,中国,200433
• 母体文献：第十三届世界湖泊大会论文集
• 会议名称：第十三届世界湖泊大会
• 会议地点：武汉
• 主办单位：中国环境科学学会
• 语种：chi

摘要

随着水体富S营养化的日益加剧,蓝藻水华爆发带来的微囊藻毒素污染成为了一个全球关注的环境问题,因此,微囊藻毒素的提取和定性定量检测成为目前迫切需要解决的课题之一。本论文探讨了纯培养铜绿微囊藻905胞内藻毒素的提取和纯化过程,并结合HPLC定量,发现铜绿微囊藻905胞内主要存在microcystin-LR(MCLR)毒素,并建立了冻融法结合超声破碎藻细胞,同相萃取(SPE)富集纯化毒素和HPLC定量分析的毒素提取过程。本论文通过研究藻细胞破碎方式,藻毒素提取液,SPE固相萃取的淋洗液和洗脱液等因素对藻毒素提取效率的影响,得出以下结论:(1)冻融,超声和振荡等三种处理藻细胞的方式中,冻融+超声的方式所得到的藻毒素约为冻融+振荡方式的2~3倍左右;(2)75%甲醇提取藻毒素效率较高,分别为含0.05%TFA的甲醇提取量的115%,为含0.1%TFA的甲醇提取量的132%,为5%乙酸提取最的126%,为纯水提取量的116%。同时,试验表明,纯水提取液较其它四种提取液不能有效破碎藻细胞,提取液偏绿,并且很容易研塞C18固相萃取柱;(3)10%和20%甲醇淋洗液不能有效的将杂质去除,导致纯度不够。40%甲醇淋洗液在去除杂质的同时也将相当一部分藻毒素洗出,导致浓度偏低.鉴于对纯度和浓度的综合考虑,本实验选取了30%的甲醇作为淋洗液的最优浓度;(4)60%甲醇+0.05%TFA,70%甲醇+0.05%TFA,80%甲醇+0.05%TFA,100%甲醇+0.05%TFA洗脱液的对比试验表明:80%甲醇+0.05%TFA的洗脱效果最好,纯度最高。本论文建立并优化了铜绿微囊藻905胞内藻毒素MCLR的提取条件:75%甲醇为提取液,冻融+超声破碎藻细胞,Sulpeco C18固相萃取柱富集纯化,30%甲醇淋洗,流速约为2mL/min,70%甲醇+0.05%TFA洗脱,从而可以收集到比较纯的藻毒素。